利用靶点特异性的sgRNA指导Cas9核酸酶在基因组上的特定靶点进行DNA双链剪切。
通过非同源末端连接(NHEJ) 可导致移码突变,实现基因敲除;通过同源重组修复(HR) 可将外源片段整合到基因组指定位点。
打破物种与品系的限制,可实现大片段敲除、多位点基因修饰,并缩短研发周期。
基因敲除原理:根据基因序列设计合成 sgRNA与Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵,Cas9核酸酶、sgRNA、基因组靶序列结合并切割双链DNA
通过非同源性末端接合 (NHEJ) 修复途径造成靶基因的移码突变或片段敲除,从而实现基因敲除。