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【动物造模】-靶向调控大鼠海马CNN3基因表达载体的构建及鉴定

  目的: 建立可调控大鼠局部脑区CNN3基因表达的技术,为进一步研究CNN3基因参与脑内病理生理过程奠定基础。

  方法: 设计并合成针对CNN3基因的全长编码序列cDNA和3条shRNA干扰靶点序列,利用基因工程技术构建CNN3-OE和3个CNN3-shRNA慢病毒载体,在立体定位仪引导下注入大鼠海马,采用蛋白免疫印迹技术筛选CNN3基因的*佳沉默序列,并找出重组表达和沉默慢病毒载体调控海马CNN3基因的变化规律。

  结果: CNN3-OE和 3个CNN3-shRNA慢病毒干扰载体均构建成功,转染后8周内对海马CNN3基因水平均有一定调控作用,其中CNN3-shRNA2载体组在转染后的8周内海马CNN3基因编码蛋白calponin-3水平均显著性下调,*高抑制率为73.26%;CNN3-OE慢病毒载体组中海马calponin-3蛋白水平具有统计学意义的升高仅在转染后第14天,上调率为93.88%。

  结论: 通过定位注射CNN3-OE和 CNN3-shRNA慢病毒载体可在体调控局部脑区CNN3基因表达,为后续的机制研究和开拓疾病防治新途径奠定基础。

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