动物造模,药效评价,葡萄膜炎 z-bio 2024-08-15 1037

　　1．模型制作方法  首建转基因阳性鼠间交配获得F1代，姊妹间交配获得F2代。实验动物包括首建转基因小鼠、F1和F2代。

　　阳性动物检测：①目的基因整合和拷贝数检测。主要包括鼠尾DNA提取后，经PCR 2对引物初筛，进一步采用斑点杂交和Southern杂交鉴定，探针为615 kb HLA2B2704基因，碱性磷酸酶直接标记和检测试剂盒。②阳性动物表达检测。剪鼠尾取血，溶解红细胞获得周围血淋巴细胞。应用免疫组织化学和流式细胞术检测目的DNA表达水平，一抗为HC10抗体(抗HLA2B27重链特异单抗)和HLA-ABC class I(抗人HLA I类分子特异抗体)，SP免疫酶标试剂盒方法按说明进行。FITC标记的羊抗鼠。

　　2．观察指标与分析

　　(1)眼部检查：裂隙灯下可见角膜后沉淀。解剖镜下观察视盘水肿不明显，视网膜血管无明显扩张。

　　(2)眼病理学检查：角膜外层上皮细胞增生，柱状上皮排列紊乱。中层胶原纤维排列不整，细胞数目增多。内上皮层细胞肥大，某些部位可见上皮细胞脱落。房水检查见前葡萄膜炎小鼠房水总细胞数增加，炎性细胞比例较正常小鼠明显增高。细胞分类包括脱落上皮细胞，虹膜色素细胞，淋巴细胞和少量单核细胞等。