动物实验,巨细胞,荧光定量PCR 中国实验动物信息网 2020-10-12 1255

　　目的：建立小鼠巨细胞病毒（MCMV）的荧光定量PCR方法，并初步应用。

　　方法：选择由NCBI出版的MCMV Smith菌株DNA聚合酶基因的保守序列，以设计引物探针，建立用于MCMV的荧光定量PCR方法，并确定该方法的特异性，敏感性，再现性和稳定性。验证性别并应用此方法检测2018年提交测试的成年MCMV小鼠血液样本和409个小鼠血液样本。

　　通过建立的MCMV实时PCR方法的标准曲线梯度为-3.418，R2值为0.999，扩增效率为96.137％，*小可定量检测的MCMV含量为47拷贝/μL。当将大鼠巨细胞病毒，唾液巨细胞病毒，人类单纯疱疹病毒，伪狂犬病病毒和霜冻疱疹病毒I型用作模板时，没有扩增曲线，并且它们具有出色的特异性。方法组内部和方法组之间的变异系数分别为0.39％-0.68％和0.48％-1.01％，具有良好的重现性和稳定性。加标小鼠的人血样品中MCMV病毒的*大稀释度为1：1000（100.75TCID50/0.1 mL），所有409个小鼠血样均为阴性。

　　结论：建立的小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR方法具有优异的灵敏度，特异性和稳定性，可以有效检测小鼠MCMV，监测实验小鼠MCMV，并补充和完善相关标准。