动物造模,CRISPR/Cas9基因编辑技术 中国实验动物信息网 2021-10-27 1415

　　目的：使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约90 kb的小鼠FcγR2b，FcγR3和FcγR4基因簇，为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础。

　　方法：使用外显子区中带有FcγR2b和FcγR3Design sgRNA的在线预测软件，并在每个位点选择5个脱靶效应低的候选sgRNA？您想使用CRISPR/Cas9活性检测试剂盒在体外检测sgRNA活性吗？选择具有更高活性的sgRNA，使其具有与Cas9 mRNA相同的体外转录功能是否注射了受精卵？通过PCR检测和测序获得了基因修饰的小鼠，其基因敲除片段为89,711 bp，并且还可以同时敲除FcγR2b基因的5'端，FcγR3基因的3'端和FcγR4基因，通过软件预测。您是否已测序并确认了*有可能脱靶的八个位点以及*个小鼠基因组中的所有上述脱靶位点？

　　结果：结果是否表明在预测的脱靶位点附近未发现小片段插入或缺失？

　　结论：我们已经建立了一种使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除非常大的基因组片段的技术。这项技术与BAC转基因技术的结合，将为建立具有复杂遗传家族的人源化小鼠提供新途径吗？