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如何鉴定犬副流感病毒以及分析部分基因序列?-【动物造模】

  目的:分离鉴定犬副流感病毒(CPIV),对其病毒的N,HN和F基因进行测序,研究其遗传变异,诊断,治疗和治疗CPIV,为预防提供分子生物学基础。

  方法:将CPIV阳性的犬肺组织注入Vero细胞,盲目传代3代,观察病变,以进行PCR鉴定,凝血特性和形态观察72收集培养基数小时。同时,使用三对特异性引物扩增整个N,HN和F基因,对其进行测序和分析,以创建系统发育树。

  结果:从狗的肺中成功分离出犬副流感病毒,并将其命名为QF20100726、该病毒可在豚鼠,猪,鸡和人类中聚集O型血液。电子显微镜观察病毒是圆形,丝状和其他各种大小的形态多样的颗粒。序列分析表明它类似于10个人类菌株。与典型的副流感病毒基因相比,N基因的核苷酸同源性为95.7%至99.8%,氨基酸同源性为97.4%至99.6%,其中两个氨基酸具有新的突变,编号257。位置从V更改为A,位置301从A更改为T。 HN基因的核苷酸同源性是95.5-99.8%,氨基酸同源性是96.3-99.6%,F基因的核苷酸同源性是94.7%-99.9%,氨基酸同源性是95.6%-99.3%。有两个特定的突变。 56位已从T更改为S,89位已从T更改为M。

  结论:已成功分离出犬副流感病毒QF20100726分离株,其血凝和超显微形态学特征与CPIV一致。,HN和F基因进化树显示此分离株与犬副流感病毒分离株相同。 08-1990(登录号:KC237063)这种关系*接近,N基因的氨基酸位于257位(V至A)和301位(A至T),F基因的氨基酸位于56位。 (从V到A)。在89位(T到M)有一个特定的突变(T变成S)。这些数据为CPIV的预防和管理奠定了基础。

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