转基因小鼠,动物造模 中国实验动物信息网 2021-05-21 1532

　　目的：构建稳定的miR-31高表达转基因小鼠，检测主要组织器官中miR-31表达的变化，提供适合于体内miR-31高表达应用的小鼠。

　　方法：使用盖特威克隆技术构建miR-31过表达载体，将使用DNA显微注射技术构建的载体注射到受精卵中，然后将其转移至假孕雌性小鼠中以自发产生。提取新生小鼠尾巴中的DNA，PCR和琼脂糖凝胶电泳用于鉴定miR-31过表达阳性小鼠，并筛选，繁殖和繁殖阳性小鼠。收集另一只阳性小鼠，提取主要组织和器官的miRNA，并通过RT-PCR检测miR-31表达。同时，我们比较了阳性和野生型小鼠神经系统中巢蛋白的表达和神经干细胞的数量。

　　结果：成功构建了miR-31过表达的转基因小鼠，并在屏障环境中繁殖了14代以上。 miR-31在所有主要组织和器官中的表达均升高且稳定。阳性小鼠的巢蛋白表达和神经干细胞数量均高于野生型小鼠。

　　结论：利用Gateway克隆技术成功构建了miR-31过表达的转基因小鼠，每一代小鼠中miR-31的表达稳定，神经系统中神经干细胞的数量也更多。进一步研究miR-31在野生型小鼠体内的功能以及miR-31过表达后神经系统疾病的治疗将是小鼠的极佳工具。