动物造模,荧光定量PCR 中国实验动物信息网 2022-01-27 1040

　　目的：建立一种快速、灵敏、特异的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测幽门螺杆菌的方法，用于幽门螺杆菌的定量检测。

　　方法：H. bilis保守基因P17序列全长ORF435bp PCR扩增，TA克隆，质粒标准pMD-HBP17构建。通过对pMD-HBP17标准品的定量分析，优化反应体系，检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重现性。通过建立的 qPCR 方法检测了 77 个临床样本，并与正常样本进行比较。聚合酶链反应。测试结果进行比较。

　　结果：建立的qPCR检测方法在108-101个拷贝的质粒DNA浓度之间显示出良好的线性和相关性。得到的标准曲线斜率达到-3.46、相关系数达到0.999，检测灵敏度达到20。 copy 77临床样本的检出率为14.3?高于正常PCR的检出率（7.8?。

　　结论：建立的H. bilisq PCR检测方法特异性好，灵敏度高，稳定性强，可用于幽门螺杆菌的定量和定性检测。