动物造模 中国实验动物信息网 2022-10-22 1698

　　目的： 建立金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌多重PCR检测方法，为实验动物细菌检测提供快速、灵敏、简便的方法。

　　方法： 根据金黄色葡萄球菌nuc基因、绿脓杆菌LasI基因、肺炎克雷伯杆菌PhoE基因和细菌通用16S rRNA基因设计出特异性引物；经过多重PCR引物浓度和退火温度的优化，特异性和敏感性的检测，建立多重PCR体系。应用该PCR体系对人工感染标本、实验动物粪便样本进行验证检测，与传统检测方法对比。

　　结果： 多重PCR分别扩增出金黄色葡萄球菌（153 bp）、绿脓杆菌（600 bp）、肺炎克雷伯杆菌（368 bp）和通用（520 bp）的目的条带。多重敏感性为10 pg，特异性检测未从其他细菌中检测出目的条带。应用建立的多重PCR体系检测出不同组合的人工感染标本，从76只粪便检测出绿脓杆菌阳性1例，与传统检测方法结果一致。

　　结论： 本文建立的多重PCR方法具有特异、灵敏、简便、快速等优点，为实验动物微生物的快速检测提供了可靠的方法。