动物造模,荧光定量PCR 中国实验动物信息网 2022-03-07 1085

　　目的 建立一种方便、灵敏的水貂阿留申病毒（AMDV）荧光定量PCR检测方法，从而实现临床样品中AMDV的快速定量检测。

　　方法 根据 AMDV的结构蛋白VP2的基因保守区域设计一对特异性引物和探针，优化PCR反应条件，建立TaqMan实时荧光定量PCR检测方法，绘制标准曲线，并进行特异性、敏感性和稳定性分析。

　　结果 建立的标准曲线在1.0×102拷贝/μL至1.0×108拷贝/μL之间具有良好的线性关系，相关系数（r2）大于0.994。该方法检测的灵敏度为 102拷贝/μL，且与犬细小病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒和水貂病毒性肠炎病毒均无明显交叉反应，特异性良好。重复性试验结果显示，该方法的组内和组间变异系数均小于3%，重复性良好。利用该方法对417份临床组织样品进行检测的结果显示，中国部分地区的AMDV阳性率为81.5%。

　　结论 本研究建立了一种重复性、特异性和敏感性良好的AMDV荧光定量PCR 检测方法，可用于 AMDV的临床检测和流行病学调查。