动物造模,CRISPR-Cas9 中国实验动物信息网 2023-12-12 1009

　　目的：为了获得白化的C57BL/6N小鼠,扩大其在皮肤移植和胚胎干细胞方面研究中的应用｡

　　方法:  通过体外设计合成Cas9mRNA和系列sgRNA(single guide RNAs),注射到小鼠的受精卵内,破坏合成C57BL/ 6N小鼠黑色素生成必须的酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因序列的第1和第2外显子,产生基因突变,获得F0代白 化的C57BL/6N小鼠,然后经过重复回交和自交,形成白化C57BL/6N小鼠近交系｡

　　结果：经过注射两对sgRNA, 成功的获得了F0代的白化小鼠,在 Tyr 基因的第1和第2外显子中均发生了缺失突变,小鼠可以将突变基因传递 给后代,并在其后代中产生了纯合的白色C57BL/6N小鼠,*后对白化小鼠突变类型进行了分析｡

　　结论：通过 CRISPR-Cas9技术破坏了小鼠 Tyr 基因,成功地建立了白化C57BL/6N小鼠近交系,为将来的嵌合体制作､组织移 植提供了新的研究工具｡