动物造模 中国实验动物信息网 2022-10-10 1101

　　目的： 采用氧糖剥夺(OGD)致HUVEC 细胞损伤模型,考察三七总皂苷(PNS)及其单体Rg1?Rb1对氧糖剥夺致血管内皮紧密连接损伤的保护作用。

　　方法： HUVEC 细胞接种于Transwell 细胞小室,待细胞融合后,设立实验组别:正常对照组?模型组?PNS 10、20、40 mg/ L 组以及Rb1 13.52 mg/ L、Rg1 12.44 mg/ L 组,于缺氧同时进行药物干预,氧糖剥夺6 h 复氧24 h 后,检测HUVEC 内皮细胞电阻值以及内皮渗透性的变化;采用激光共聚焦显微镜,免疫荧光法检测HUVEC 细胞ZO-1?claudin-5 蛋白表达的变化。

　　结果： 与正常对照组相比,HUVEC 细胞缺氧6 h 复氧24 h 后内皮细胞间紧密连接电阻显著降低,细胞渗透性显著升高(P < 0.05)。PNS 20、40 mg/ L 组能够显著抑制模型组紧密连接电阻的降低,抑制HUVEC 细胞渗透性的升高(P < 0.05)。人参皂苷Rb1 能够显著升高OGD 6 h 复氧24 h 后内皮紧密连接电阻,降低HUVEC 细胞渗透性(P < 0.05)。免疫荧光检测结果显示,正常对照组HUVEC 细胞的ZO-1 及claudin-5 蛋白主要分布于细胞膜周围,排列连续,显示出内皮细胞的典型铺路石排列。缺氧6 h 复氧24 h 损伤后,模型组细胞边缘的紧密连接蛋白显著减少,环形结构断裂,甚至消失,细胞核内紧密连接蛋白呈增加趋势。PNS 20、40 mg/ L 及Rb1 13.52 mg/ L 可观察到细胞间紧密连接局部恢复,呈铺路石样结构。

　　结论： PNS 对缺血致血管内皮细胞间紧密连接损伤有保护作用。