动物造模,荧光定量PCR 中国实验动物信息网 2022-12-28 1677

　　目的 建立小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR方法并对其进行初步应用。

　　方法  选取NCBI发表的MCMV Smith株DNA polymerase基因保守序列设计引物探针，建立MCMV的荧光定量PCR方法，对方法的特异性、敏感性、重复性及稳定性进行验证，并应用该方法检测掺人MCMV的小鼠血液样品及2018年度送检的409份小鼠血液样本。

　　结果 建立的MCMV荧光定量PCR方法标准曲线 Slope为-3.418，R²值为0.999，扩增效率为96.137%，可定量检测到的MCMV*低含量为47 copies/μL。以大鼠巨细胞病毒，猴巨细胞病毒，人单纯疱疹病毒，伪狂犬病毒及霜疱疹病毒I型为模板均无扩增曲线，特异性良好。方法组内和组间变异系数分别为0.39%-0.68%和0.48%-1.01%，重复性和稳定性好。可检测到掺人小鼠血液样品中MCMV病毒的*大稀释度为1∶1000（100.75 TCID50/0.1mL），409份小鼠血液样品经检测均为阴性。

　　结论 建立的小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR方法有很好的敏感性、特异性及稳定性，可有效地检测小鼠中MCMV，为实验小鼠MCMV的监测及相关标准的补充完善提供了技术参考。