动物造模,基因编辑技术 中国实验动物信息网 2022-08-26 1057

　　目的:使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约为90kb的小鼠 FcγR2b,FcγR3,FcγR4基因簇,为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础｡

　　方法:使用在线预测软件在FcγR2b,FcγR3外显子区设计sgRNA,在每一位点挑选脱靶效应较低的五个候选sgRNA｡通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒检测sgRNA在体外的活性｡选取活性较高的sgRNA体外转录,与Cas9mRNA一并注射受精卵｡通过PCR检测及测序,得到1只敲除片段为89711bp的基因修饰小鼠,且同时敲除FcγR2b基因5’端,FcγR3基因3’端及FcγR4基因｡而且还利用软件预测了8个脱靶可能性*高的位点,并对首建鼠基因组的上述8个脱靶位点全部测序确认｡

　　结果:结果显示未在预测脱靶位点附近发现小片段插入或缺失｡

　　结论:建立了利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除基因组超大片段的技术,该技术结合BAC转基因技术,将为建立含有复杂基因族的人源化小鼠提供新的途径｡