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【动物造模】-如何建立慢性前列腺炎啮齿动物实验模型?

  转诊:慢性无菌性前列腺炎(CAP)或慢性盆腔疼痛综合征(CPPS)是临床上最常见的前列腺炎类型,占90多岁,是泌尿科的常见疾病。指前列腺的炎性状态。发病率约为3-16、美国国立卫生研究院 (NIH) 将前列腺炎分为四类:急慢性细菌性前列腺炎(I 型和 II 型)、慢性前列腺炎(III 型)和无症状性前列腺炎(IV 型)。其中以慢性非细菌性前列腺炎(CNP)或慢性前列腺炎-慢性盆腔疼痛综合征(CP/CPPS)最为常见,约占90? CP/CPPS又分为IIIA和IIIB,取决于前列腺样本是否有白细胞浸润。 CNP的病因、发病机制和病理生理学目前是多种多样的。多项研究表明,发病率可能与未知微生物感染、自身免疫性疾病、氧化应激、内分泌失调、神经病和社会心理有关。在组织学上,前列腺炎的特征是围绕腺或导管的间质结缔组织中的多核和单核细胞浸润(中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞和浆细胞)。典型的临床症状是尿频、尿急、排尿困难、排尿、排尿或排便后排尿异常,以及剧烈的全身疼痛(腰骶痛、下腹痛、会阴、睾丸、大腿内侧等)可影响性功能正常。慢性非细菌性前列腺炎对患者的生活质量有重大影响。人类和啮齿动物的前列腺在解剖学上完全不同。一个好的动物模型对于更好地理解 CAP 至关重要。今天,除癌症之外的许多人类疾病都有良好的动物模型作为获取研究数据和测试治疗策略的来源。 CP动物模型的评价标准因建模方法不同而不同,因此检测方法和评价标准也不同。

  动物模型:建立好的动物模型的第一步是成功研究前列腺炎的病因。在动物模型中没有公认的前列腺炎免疫标准方法。国内外许多研究人员使用啮齿类动物作为实验动物,如Wistar大鼠、SD大鼠、lewis大鼠、C57BL/6小鼠、NOD小鼠等。不同的动物物种有不同的建模方法。实验性自身免疫性前列腺炎(EAP)模型:EAP大鼠模型:目前,尚无用于创建EAP动物模型的标准方法。国内外许多研究人员将大鼠作为实验动物。该模型由 Pacheco-Pruil 等人提供,使用 Wistar 大鼠性腺纯化蛋白并将完全弗氏佐剂 (CFA) 注射到同一只大鼠的皮下组织中以诱导自身免疫。结果,8 只大鼠中有 3 只(在接种 38  MAG 后 21 天显示促炎反应。对相同大鼠的重复检查显示 20 只大鼠中有 9 只(45  前列腺症状)。30 天后出现. 这种经典的建模技术至今仍在使用。但是,这种方法的成功存在很多局限性。目前,在国内外文献中,炎症的严重程度是纯化的蛋白质。据报道,不仅与溶液的浓度,还与注射的时间、部位和剂量有关。典型的注射时间为 0、15 和 30 天。大鼠足底、腹股沟区、子宫颈对该区域总共进行了 5 次皮下注射。太蛋白纯化液浓度过高会导致大鼠死亡,浓度过低不足以引起自身免疫。有人用不同浓度的蛋白纯化液来评估量效关系,发现最佳接种量为40-60mg/ml。Donadio等人,前列腺酸性磷酸酶(PAP)我们也发现它可能是诱发自身免疫性前列腺炎的主要抗原,当用重组大鼠或人PAP免疫大鼠4周后,在小鼠体内观察到体液免疫。大鼠模型和细胞。未观察到损伤性 T 细胞反应 (CTL) 或组织变化,尽管哥本哈根大鼠在静脉注射重组人 PAP 疫苗后可引起 CTL 反应和组织特异性前列腺炎症。然而,没有 PAP 特异性抗体具有已经观察到,表明 PAP 是否诱导细胞或体液免疫反应可能与大鼠类型有关。此外,在 Wistar 大鼠中,来自同基因 EAP 大鼠模型的脾脏单球也可用于诱导前列腺炎症。在 EAP 模型中,引起大鼠前列腺炎自身免疫的主要抗原物质是可引起细胞和体液免疫的前列腺甾体结合蛋白(psbp),这项研究发现,单药注射后7天,单球体开始浸润,随后迅速增加第28天达到最大值,浸润的单球主要集中在前列腺的间质间隙,伴有出血和部分组织纤维化,同时出现肥胖细胞时发生炎症。浸润细胞主要是CD4+ T细胞和CD8+T细胞中有几种巨噬细胞。

  EAP 小鼠模型:Keetch 等人提出了第一个 EAP 小鼠模型。使用 CFA,将来自相同小鼠腹侧前列腺叶的提取物以 0.75 mg 的最大剂量接种到 C57BL/6 小鼠中,并辅以百日咳毒素。发现 100 C57BL/6 小鼠发展为广泛的前列腺炎。它是炎症的程度,集中在前列腺的背面,炎症的程度与剂量有关。虽然不同类型的SJL和A/Jj小鼠的结果不尽人意,但我们发现SJL和A/J小鼠会引起一些炎症。免疫后三十天,发现单核细胞浸润和炎症。这部分集中在间质和血管附近。研究表明,C57BL/6小鼠建立EAP模型的成功率高于其他类型小鼠。 Zhou等人使用从前列腺中提取的T2肽(从前列腺中的TRPM8中提取)建立了CP/CPP模型。使用 T2 + CFA + AL (OH) 3. 输液。实验组在第 1、14 和 28 天皮下注射 (1 ml)。先前成功的 CP/CPP 模型主要在前列腺中增强了 T 细胞积累和前列腺抗原抗体识别。在该模型中,在实验大鼠中观察到T细胞增强和巨噬细胞浸润到前列腺基质和腺上皮中,证明CP/CPPS模型成功建立。此外,在CP/CPPS患者的精液中发现了高水平的促炎细胞因子(IL-1β和TNF-A)和非特异性炎症标志物(CRP)。该模型是CP/CPPS的有效模型,因为T2 + CFA + Al (OH) 3 组中TNF-α和IL-β的水平显着增加并且CRP含量增加。 T2 + CFA + Al (OH) 3 佐剂免疫组的炎症比其他组更严重,T2 + CFA + Al (OH) 3 佐剂的混合物诱导实验性自身免疫性前列腺炎。 (EAP)),发生率为 100 。ivero 等人使用OD 小鼠建立了 EAP 模型。他们还将 MAG 匀浆与 CFA 混合并皮下注射到多个部位。结果表明,NOD 小鼠在接种疫苗后 10 天和 20 天出现明显的前列腺炎症。炎性浸润的程度非常大,在前列腺的外侧,背侧,精囊和凝血腺中发现中度至重度的炎性病变。我们不仅发现了体液免疫反应,还发现了炎症反应中的细胞介导的免疫反应。同一组的进一步实验表明,两次注射 1.0 毫克 Wistar 大鼠 MAG 或 30 毫克 Wistar 大鼠 PSBP 可在年轻的雄性OD 小鼠中诱发 80-100  前列腺炎。老鼠会发炎。接种 MAG 的小鼠比接种 psbp 的小鼠水肿更多。简而言之,自身免疫建模方法并不适合所有啮齿动物。选择 Wistar 大鼠建立 EAP 模型主要是由于前列腺炎的自发性、年龄依赖性和组织病理学变化,在许多方面与人类慢性前列腺炎非常相似。如果注射的前列腺素纯化液浓度为40-60mg/ml,造模成功率可达38?选择OD 小鼠建立 EAP 模型,主要是因为它们比 C57BL/6 小鼠和 Wistar 大鼠更敏感,并且具有 100  模型成功率。确认点头鼠标适合建立EAP模型。总的来说,NOD小鼠模型相对于EAP大鼠模型的优势在于小鼠品种易得,易于培养,适合需要大量样本数据的实验,还有一些可以使用。的免疫学方法。研究前列腺炎。由于其免疫特性,许多研究人员倾向于选择小鼠 EAP 模型来研究前列腺炎的机制和治疗方法。主要缺点是引起自身免疫性前列腺炎的组织的自身抗原尚不清楚,NOD小鼠自发发展为糖尿病并预防前列腺炎。

  年龄相关性前列腺炎模型:大鼠前列腺炎模型:年龄相关性前列腺炎是研究自身免疫性前列腺炎的常用模型。此前的研究表明,不同种族的大鼠到了一定年龄会自发地发展为非细菌性前列腺炎。自发性前列腺炎表明中度单核细胞浸润,主要是 CD4 + T 细胞,炎症主要发生在前列腺的基质、腺泡和侧叶周围。研究表明,这些大鼠对自身前列腺抗原的抵抗机制存在缺陷,随着年龄的增长和物理环境的变化而进一步减弱,并随着年龄的增长而自发,可导致自身免疫性前列腺炎。不同类型的大鼠发生自发性自身免疫性前列腺炎的几率不同。 Vykhovanets 等人发现雄性 Lewis 大鼠在大约 12 周内出现了前列腺外叶的自发性炎症,而 SD 大鼠在 22-24 周内出现了腹部和侧部前列腺。炎症发生率低(大约16老年Wistar大鼠自发性CNP发生率为27,哥本哈根大鼠第20周自发性前列腺炎发生率为88。

  小鼠前列腺炎模型:自发性前列腺炎在大鼠中的可能性很小,但在 1990 年代后期,研究人员发现,老年OD 小鼠仅自发地发生在胰腺、甲状腺、甲状旁腺和肾上腺中。相反,我们发现自身免疫发生发展,自身免疫也是如此。前列腺。它可以产生自发性自身免疫。Jackson 等人在雄性OD 小鼠中在 20 周内。我们发现自发性自身免疫性前列腺炎可能会发展并保持稳定。NOD 小鼠患有 I 型胰岛素依赖型糖尿病。前列腺白细胞抗原到 40 周,70 OD小鼠出现前列腺炎,具有细胞免疫和体液免疫,20-30周龄雄性小鼠发病率是8周龄小鼠的2-4倍。两者均获得8周龄点头小鼠对前列腺没有细胞和体液免疫反应。研究表明,高滴度的抗前列腺抗原 IgG 抗体是以 IgG2b 为基础的。已经表明它可能出现在患有老年雄性肿瘤的小鼠的血清中。主要的前列腺抗原鉴定为psbp。老年雄性NOD小鼠自身免疫性前列腺炎。疾病的发展可能导致自发性自身免疫性前列腺炎的发展,随着年龄的增长机体对前列腺抗原的抵抗力逐渐下降。已经发现自发性自身免疫性前列腺炎可以通过被动发展大鼠禁欲。以前的研究表明,某些类型的大鼠达到一定年龄后,非细菌性前列腺出现自发性炎症。该模型的建立与大鼠和小鼠的种类和年龄有关。Lewis, Wistar 的年龄发展,哥本哈根大鼠和NOD雄性小鼠具有自身免疫性,为前列腺炎的研究提供了良好的模型,是一种稳定且可长期维持的模型,其病理形态与临床症状相似,是一种良好的病理。具有特异性的人CP治疗适用于药物研究。但由于建模时间超过三个月,时间较长且成本较高,且重现性不理想,因此使用较少。对于人类慢性前列腺炎研究,最好以哥本哈根大鼠为模型动物,对于20周模型,潜在成功率为88?。 激素和去势诱发的前列腺炎模型:大鼠前列腺炎模型:众所周知,前列腺是依赖雄激素的器官。雄激素在前列腺疾病的生长、功能和调节中起重要作用。该模型使用雌激素和去势方法导致荷尔蒙水平异常,扰乱动物体内雄激素平衡,对前列腺产生非细菌性炎症反应。有研究人员用17β-雌二醇联合去卵巢模拟大鼠,结果表明三种不同浓度的雌二醇可成功诱发前列腺炎炎症。此外,发现向Wistar大鼠施用100μg 17β-雌二醇2至5天成功地发展为前列腺炎。用十一酸睾酮胶囊(2.0 毫克/天)治疗 10 周后,10-12 周龄的新生大鼠出现严重的前列腺炎。观察显示受累前列腺小叶的两个前列腺出现严重水肿和淋巴细胞、单核细胞浸润和广泛纤维化。这表明该方法有效 100

  小鼠前列腺炎模型:Pakarainen 等人,67  LH 受体缺陷型 LuR-KO 小鼠用睾酮治疗,突出的特点是前列腺中有大量的间质和间质组织淋巴细胞,我发现我表现出前列腺炎。在第21天,为期8周的睾丸激素替代疗法开始恢复雄性lur-ko小鼠的性腺和附件功能。芳香化酶 (AROM+) 的过度表达可导致小鼠内源性雌激素水平升高。 AROM +小鼠在前列腺开始时是正常的。随着雌激素水平升高,前列腺中逐渐出现肥大细胞和巨噬细胞,炎症主要表现为粒细胞和T淋巴细胞浸润。雌激素诱导的CNP模型简单,大鼠品种易得,模型试剂易得,模型成本低。病理变化类似于老年大鼠的自发性 CNP。该大鼠模型非常适合具有良好病理特异性的人类 CP 疗法的研究,因为年龄依赖性自发性大鼠 CNP 在病理学上与人类 CP 相似。...缺点方面,联合雌激素去势对无菌技术和复杂手术的要求更高。

  化学前列腺炎模型:将化学物质直接注射到动物的前列腺中,产生无菌CP。目前使用的化学品包括甘油、tiglium、甲醛巴豆油和 FCA。其中,卡拉胶制剂是最常用的,对前列腺组织的损伤较小,建模更类似于慢性炎症。adhakrishnan 和allu 使用 SD 大鼠将 3 aginan 注射到前列腺中建立 CNP 模型并测试热和机械刺激降低会阴痛阈的程度。他们发现模型大鼠的炎症细胞以单核细胞和淋巴细胞为主,纤维结缔组织增生、间质充血、水肿等慢性炎症。化学建模是一种模拟前列腺炎病理生理的模型,通过将化学物质直接注射到前列腺中,引起炎症,不可避免地对前列腺组织造成极大的损伤。急性前列腺炎和慢性胰腺炎有一定的区别。

  模型指标:由于模型方法不同,CP动物模型的评价标准与检测方法不同。然而,大多数指标基于组织学、形态学、前列腺指数、尿动力学、炎症因子和疼痛等方面。

  病理指标I型指标(核心指标):CP最直接的指标是前列腺组织的明显炎症。病理观察可以准确地确定前列腺炎的严重程度,包括炎性细胞的浸润,炎性细胞的外观,组织水肿,腺体坏死,脱落和腺体上皮丢失,并用光学显微镜观察其是否存在。病理分类如下: “0”表示大部分前列腺处于静止状态,腺体萎缩,腺上皮起皱。腺腔内无分泌物,腺腔明显缩小。 “I”表示前列腺中的大部分腺体都扩张了。腺腔内有分泌物,但分泌物很少,周围有少量炎症细胞。 “II”表示前列腺明显扩张,腺上皮薄而扁平,腺腔内充满红色分泌物。 “III”表示前列腺明显扩张,腺体增大1至3倍。腺上皮扁平,腺腔内充满红色分泌物。腺腔明显扩大并散布在炎症细胞周围。两个人根据上述评分标准对每个前列腺病理切片进行随机评分。

  生化指标(直接相关指标):CP的直接指标是前列腺液或其匀浆中白细胞显着增加,卵磷脂小体分布减少。前列腺炎免疫因子常检测前列腺匀浆中的 IgG、IgA 和 IgM,成功的模型建立显着提高了 IgA 水平。根据神经内分泌学说,前列腺炎会引起疼痛和前列腺液分泌过多。前列腺匀浆中NE,PG,组胺,5-HT和NGF的水平可增加IL-6、IL-8,IL-10,TNF-α和IL-1β的水平。根据免疫学理论,当模型正常复制时,血清 T 或前列腺组织匀浆会降低 T、E2、血清前列腺特异性抗原 (PSA) 和 C 反应蛋白 (CRP) 水平。让我。

  表观指标、尿量指标、疼痛指标:明显指标包括动物前列腺指标、排尿量、液体摄入量、开放活动。造模成功后,前列腺湿重和前列腺指数增加,尿量减少,饮水减少,开放活动减少,头发光泽下降。前列腺炎会引起泌尿系统的变化。前列腺炎动物的膀胱压力、排尿间隔、最大尿压等尿液动态参数可以直接反映前列腺炎的病情。

  结论:慢性前列腺炎病因复杂,病理生理过程不清楚,临床治疗难度很大。建立有效的动物模型对于更好地了解自身免疫性前列腺炎的病因和寻找正确的诊断和治疗方法尤为重要。在实际应用中,您可以根据实验目的和显示条件选择合适的测试方法。上述方法仍然有很多缺点。因此,有必要继续寻找更适合前列腺炎病因、发病机制和临床症状的模型。

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