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胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法

  目的:建立一种快速,灵敏,特异的实时荧光定量PCR检测方法,用于TaqMan探针定量检测胆汁中幽门螺杆菌。

  方法:PCR扩增H.bilis保守基因P17序列全长ORF435bp,TA克隆,构建质粒标准pMD-HBP17。通过对pMD-HBP17标准品进行定量分析,优化了反应系统,以检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度,特异性和可重复性。通过建立的qPCR方法检测了77个临床样品,并与常规PCR进行了比较。比较测试结果。

  结果:建立的qPCR检测方法显示出良好的线性和108-101个拷贝的质粒DNA浓度之间的相关性。所得标准曲线的斜率达到-3.46、相关系数达到0.999,检测灵敏度达到20。拷贝的77个临床样品的检出率为14.3%,高于正常PCR的检出率(7.8%)。

  结论:所建立的H.bilisq PCR检测方法特异性强,灵敏度高,稳定性强,可用于幽门螺杆菌的定量和定性检测。

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