流产动物模型 中国实验动物信息网 2021-12-23 2944

　　流产为妇科常见疾病，其病因较为复杂。常用的流产动物模型有药物性流产、溴隐亭致流产、肾虚流产及反复自然流产模型等。

　　(一)药物性流产动物模型

　　【造模机制】药物流产是指在怀孕早期采用药物终止妊娠的方法。目前效果肯定的药物为米非司酮配伍米索前列醇，完全流产率可达95％～98％。

　　米非司酮具有与孕激素受体极强的亲和力，导致蜕膜变性，坏死出血，抗着床，阻止胚胎发育，终止早孕的作用。米索前列醇能促使子宫收缩，绒毛球在逐步的收缩过程中排出，终止妊娠。

　　【造模方法】

　　1．选用SD大鼠，雌性鼠体重220～250g，雄性鼠250～300g。将大鼠按雌雄2：1比例合笼，次日晨进行阴道涂片检查，以发现有精子为妊娠第1天。

　　2．自动物受孕后第7天，米非司酮(8:00am)+米索前列醇(6:00pm)各1次(两药间隔约10小时)，大鼠完全流产分别用16.6mg/kg(体重)+100μg/kg(体重)；不完全流产用8.3mg/kg(体重)+100μg/kg(体重)。同时于阴道内置人定量棉球一个(棉球重85～90mg，用塑料薄膜包裹半侧，以防血液漏出和尿液反流)。次日分别于8:00和18:00将棉球取出，放入塑料袋中密闭冷藏保存，同时置换一个新棉球于阴道内，观察阴道出血情况，连续至第14天，处死动物，观察子宫病理形态学变化，将收集的每鼠阴道棉球进行出血量测定。

　　【模型特点】

　　1．米非司酮+米索前列醇致流产法容易观察子宫出血量的变化。

　　2．子宫出血量计算方法  大鼠尾静脉用血红蛋白吸管取血0.02ml，用4ml浓度为1.25mol/L的氢氧化钠溶液稀释作为标准品，再将大鼠自身收集旧的阴道出血棉球，用同浓度氢氧化钠液少量多次将棉球洗净。分光光度计在546nm波长测各自的吸光度(A值)，代入公式，计算得出该大鼠子宫出血量。

　　子宫出血量(ml)=尾静脉血(0.02ml)×子宫内浸提液A×V2/(尾静脉血A值×V1)

　　式中：V1＝稀释尾静脉血所用1.25mol/L氢氧化钠量(4ml)。

　　v2=浸提子宫血(棉球)所用1.25mol/L氢氧化钠量(ml)。

　　3．造模时间较短，1～2周即可复制成功。

　　【模型评估和应用】

　　应用米非司酮配伍米索前列醇进行药物流产是目前终止早孕的主要方法之一，具有口服简便、作用快、副作用轻、避免手术痛苦、减少并发症等优点。本法造模方法简便可靠，药效评价指标客观准确，在观察子宫出血量的变化方面，本模型具有一定的优越性，可作为药物终止早孕引起子宫出血防治研究的药物筛选、药效评价模型。

　　(二)溴隐亭致流产动物模型

　　【造模机制】早孕期为生理性高催乳素(prolactin,PRL)状态，PRL对妊娠黄体功能的调节及妊娠的维持起重要作用。溴隐亭皮下注射早孕期鼠，可使其血清PRL显著下降，妊娠黄体LH/CG受体及mRNA表达随之减少，黄体功能下降甚至黄体溶解，所分泌的黄体酮及雌二醇减少，影响子宫内膜蜕膜化，造成动物流产。

　　【造模方法】溴隐亭致SD大鼠流产模型的建立：所用大鼠在实验室饲养2周，使其适应环境，雄性、雌性按1:1合笼，次晨见阴栓者或阴道涂片发现有精子者计为妊娠第1天。于孕6～8天分别皮下注射溴隐亭0.125mg/d、0.25mg/d两个剂量组。于孕4、7、10、12天以剪尾法采集外周血，提取血清，置-20℃待用，放免法测定PRL水平。孕12天处死，取下子宫。计数活胚胎数，无胚胎存活者计为流产。

　　流产率=流产鼠只数/妊娠鼠只数×100％。

　　【模型特点】

　　1．溴隐亭诱发Sprague-Dawley大鼠流产模型血清PRL及黄体酮低于对照组，内分泌功能不足及偏向Thl型免疫反应的病理生理特点，符合临床上低PRL及免疫识别功能低下流产特点。

　　2．0.25mg/d剂量组流产率达100％，0.125mg/d剂量组流产率达75％。

　　【模型评估和应用】溴隐亭诱发大鼠流产模型为深入研究母胎界面的免疫-内分泌功能调节异常的流产发病机制及深入研究药物致流产的病理机制，并探讨其防治措施，研究药物保胎疗效及自然流产发病机制的理想模型。

　　(三)肾虚流产动物模型

　　【造模机制】羟基脲(hydroxycarbamide)可使动物出现体重增加缓慢、被毛蓬松、拱背少动等类似肾虚证候。米非司酮可拮抗黄体酮受体而终止早孕、抗着床，而发生流产。选用羟基脲加米非司酮可成功地制备大鼠肾虚流产模型。

　　【造模方法】

　　1．选用Sprague-Dawley大鼠，体重(220±20)g，适应性饲养一周开始实验，以雌雄1：1合笼单笼交配，以阴道涂片中见到精子为妊娠第1天，并将雄鼠取出。

　　2．妊娠第3天始至第12天灌服羟基脲蒸馏水溶液。动物给药量为每天每百克体重20mg。研粉溶于蒸馏水中备用。妊娠第12天灌服米非司酮1次。米非司酮，每片25mg。动物给药量为每天每百克体重3.75mg。研粉溶于蒸馏水中备用。观察所有造模大鼠的一般情况，如：体重、被毛、活动情况等。

　　3．所有雌鼠于妊娠第15天处死。观察活胎数、流产数、流产率的变化以及对血清抗滋养细胞抗体和IL-2的作用等。

　　4．正常胚胎数、流产胚胎数判定标准  正常胚胎：宫内未见淤血，胚胎淡红色。流产胚胎：宫内胚胎呈黑褐色，或曾出现阴道出血，解剖时子宫呈“竹节状”，官腔内未见淤血或坏死胚胎，流产率=流产胚胎数/(流产胚胎数+正常胚胎数)。

　　【模型特点】

　　1．羟基脲给药1周左右大鼠出现体重增加缓慢、被毛蓬松、拱背少动等类似肾虚证候；模型对照组还见体重减轻、畏寒肢冷等症状；孕12天予米非司酮后，孕12天或14天均见阴道出血。

　　2．羟基脲加米非司酮所造成肾虚大鼠流产模型的流产率可达80％。

　　3．造模可使妊娠大鼠蜕膜重量较正常妊娠大鼠降低。

　　4．流产子宫肉眼观察为暗黑色，光镜下或见羊膜囊内出血、胎盘出血，或见蜕膜细胞部分出血坏死。妊娠黄体可见较多黄体细胞中有脂滴，或伴血管充血、核固缩及局灶性坏死。

　　5．造模组孕鼠黄体酮、孕激素受体mRNA均低于同期正常妊娠大鼠，提示米非司酮终止妊娠是模仿了黄体功能不全自然流产的过程。

　　【模型评估和应用】选用羟基脲加米非司酮法制备的大鼠肾虚流产模型，羟基脲给药1周左右大鼠出现体重增加缓慢、被毛蓬松、拱背少动等类似肾虚证候，孕12天予米非司酮后，孕13天或14天均见阴道出血现象；解剖时发现流产；提示本模型制备成功。羟基脲、米非司酮建立肾虚流产模型模拟了临床患者肾虚自然流产的基本病理变化，是一种可重复的病证结合模型。

　　(四)反复自然流产动物模型

　　【造模机制】CBA/J和DBA/2是较常用的两个小鼠近交品系。CBA/J(雌)×DBA/2(雄)交配组合具有易患反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)的特点。DBA/2雄鼠与CBA/J雌鼠交配组合(实验动物学命名为CBA/J×DBA/2)作为反复自然流产的动物模型，已经在国际上受到广泛关注。

　　【造模方法】雌性CBA/J小鼠、雄性DBA/2小鼠，年龄均达到10周，已经性成熟。按雌雄1:1的方式同笼，作为期60天的观察，出现阴栓定义为孕1天。观察小鼠平均每窝产仔数、雌雄同笼至第1窝鼠仔出生的平均时间、鼠仔出生后生长曲线等指标。

　　【模型特点】

　　1．CBA/J和DBA/2是仅次于BALB/c和C57BL/6的两种常用的小鼠近交系。CBA/J×DBA/2小鼠具有反复自然流产的特点，胚胎吸收率恒定于30％～45％。而小鼠因染色体异常所发生的流产仅占4％左右。

　　2．流产率相对恒定。

　　3．较之裸鼠等免疫缺陷动物，抗感染力强、繁育成本低。

　　【模型评估和应用】这一模型的优点是：①实验动物来源比较充足、可靠。②流产特点是围着床期流产。人类不明原因的反复自然流产也多发于这一时期，因此更具研究价值。③实验具备高度可重复性。