动物造模,肝纤维化模型 中国实验动物信息网 2021-11-29 1582

　　（1）繁殖方法将人血清白蛋白4 mg /头分别于第1、15、25和35天以相同剂量皮下注射到体重120至150 g的雌性Wistar大鼠中，并将人血清白蛋白注射入正常生理盐水。然后用等量的不完全弗氏佐剂乳化。上次免疫后十天，抽取血液进行抗体测试，选择抗白蛋白抗体阳性的患者，并将白蛋白每周两次注入尾静脉。其中，*周静脉内注射2.5 mg /只小鼠，然后将每次挑战注射剂量增加0.5 mg /只小鼠至4.5 mg /只，并且剂量维持至少2个月；或者*次和3次。时间为8毫克/只小鼠，其余均为4毫克/只小鼠，共9次。同时，在挑战注射之前每天两次皮下注射前列腺素E1（PGE1）0.2 mg /小时，直到建模完成。另外，每头猪每周两次腹腔注射0.5 ml猪血清或2 ml每只猪新鲜无菌成年混血猪，连续10周，并在停止注射后继续观察10周。在建模期间，每天观察动物的总体状况。每周称重一次。免疫攻击结束后及随后的观察期，在不同时间采集全血以制备血清，并采集肝脏以制备组织匀浆以进行免疫复合物和生化检查，根据光学和电子显微镜的要求，将材料取样，固定，包埋，切片，连续石蜡切片用HE，VG和甲苯胺蓝染色，并进行组织形态学检查。冷冻切片用于肝内IgG和补体C3检测的免疫荧光。

　　（2）模型特征：皮下注射2.5-4.5 mg人类血清白蛋白后10周，大约80％的模型动物可能会出现纤维化甚至肝硬化程度不同，是的，死亡率为20％至30％。 ..经过30天的4-8 mg挑战注射和PGE1皮下注射保护，模型动物可以发展为肝硬化，死亡率仅为5％。在激发注射的早期阶段，肝脏的组织结构几乎是正常的，但是脂肪储存细胞的增殖是活跃的。在注射过程中，血清C3含量明显降低。在后期，它是肝脏。交界细胞变形和死亡，炎性细胞浸润，门静脉区域和小叶间纤维组织增生，肝胶原蛋白含量升高，肝窦，血管壁，结缔组织和细丝球体被染色，血清C3含量逐渐升高。还原状态并超过正常值。连续注射猪血清7周，在注射后10周，透明质酸（HA），层粘连蛋白（LN）和III型胶原蛋白原（PCⅢ）浓度升高模型动物血清和组织匀浆。扩张，纤维增加并延伸至小叶，连接至相邻的门静脉区域和肝静脉，分裂并围绕肝实质，增加门静脉区域和中隔基质成分，细胞组成减少，形成主要细胞外基质的纤维状门）沉积物，门脉细胞大多是薄的，深染的纤维细胞;在建模的15周内，肝组织结构基本上与10周相同;门脉面积和隔膜;在建模的20周内，肝脏中的某些纤维间隔有些动物会间歇性地减少或消失。除了上述纺锤形的间充质细胞外，在门静脉和隔室中还可以看到酸性粒细胞（Eos）的浸润。连续攻击注射在8周达到峰值，并在10天后逐渐减少。星期。即使在20周之后，您也可以在门户区域看到少量的Eos。连续八周注射后，免疫荧光不仅对血管壁和窦壁的IgG和C3呈阳性，而且对分布在众多细丝和编码中的间质呈阳性。在第10和15周结束时，IgG和C3呈阳性。 C3在间质和门脉间质中分散分布，并且正性进一步增强。在第20周结束时，间质和窦壁中的IgG和C3减弱。连续挑战新鲜的猪无菌混合血并注射10周。形成了模型动物的纤维隔膜，并变得相对较薄。在10-14周时，纤维隔膜逐渐增厚，肝脏组织严重分离，形成更多的假小叶，并且面积很小。这种变化趋势持续了长达20周。

　　（3）比较医学人肝纤维化是一种病因复杂的临床综合征，是慢性肝炎发展为肝硬化的必要阶段。免疫因子诱导的肝纤维化是主要的病理特征，尤其是在各种类型的病毒性肝炎和某些肝脏疾病中。人或异源动物的血清进入人体，白蛋白和大分子物质被用作异源抗原，以刺激人体产生相应的抗体。当抗原重新进入人体时，它会形成抗原-抗体免疫复合物（IC）。它主要存在于肝脏中，并沉积在门静脉和中央静脉周围，引起局部炎症反应，刺激储脂细胞的增殖，转化为成纤维细胞，然后分泌胶原蛋白纤维，并引起肝组织纤维化。同时，异源血清会触发肥大细胞介导的I型变态反应（LPR），引起大量Eos浸润并释放出多种物质，例如转化生长因子β1（TGF-β1）。成为。原始间充质细胞（PMC）和肝星状（HSC）激活，诱导并合成大量ECM。这会导致组织中过多的ECM沉积，从而导致肝纤维化。该模型的主要特征是模型动物肝纤维化的稳定病理形态。停止注射后，先前形成的肝纤维组织的自然重吸收程度相对较轻。您可以维持肝纤维化的形式。脂质储存和成纤维细胞参与转化过程，对肝细胞的损害很小。该模型在肝细胞损伤方面不同于肝炎后肝纤维化和肝硬化，但是鉴于当前的肝炎病毒无法复制到实验性肝纤维化模型这一事实，该模型是由免疫损伤引起的。因此，通过结合CCl4诱导的肝纤维化动物模型，对主要由病毒性肝炎引起的慢性肝病进行肝纤维化的病因学的综合研究和评估是一种更可行的方法。一些学者对人血清白蛋白诱导的大鼠肝纤维化模型，建模，建模环境以及用于防止导致动物过度免疫反应的动物免疫状态的实验方法进行了系统研究，发现死亡对建模成功率的影响非常重要。影响。选择在（22±1）°C的环境条件下进行模型复制的6周龄大鼠似乎是适当的，并且每天皮下注射PGE1是一项关键技术。除人和猪血清外，牛血清白蛋白还可用于复制免疫性肝纤维化的动物模型。