动物造模,肝衰竭动物模型 中国实验动物信息网 2021-11-16 901

　　（1）模型方法通过腹膜内注射100mg/kg体重的乙醚或氯胺酮麻醉成年大鼠，固定背部，并沿上腹部的横向切口打开腹部。用电凝器烧灼腹部血管壁以止血。暴露肝脏，切开镰状韧带，冠状动脉韧带和小叶间韧带，暴露肝门，首先结扎并切开门静脉头皮分支的腹胆管，门静脉头皮分支与肝动脉，用5-0丝线结扎头皮分支和门静脉。伴有肝动脉。然后小心地将右门静脉分支分成右上和下肺叶，以及相关的肝动脉，并用5-0丝线结扎门静脉的右或右上肺叶分支。此时，结扎的肝叶处于缺血状态。在结扎上方用5.5号针刺穿门静脉，并注射10 ml/kg体重的5％葡萄糖和氯化钠溶液或乳酸钠林格氏溶液，直到肝叶变白，然后用5-0丝线去除肝叶迅速结扎。总共去除了85％-95％的肝组织。确保没有出血后，缝合腹壁切口。手术后，观察大鼠的精神状态，活动状态，肝功能变化和12小时生存率。手术后，大鼠清醒并翻身，这是手术成功的标志，并且在12小时内站起来并死亡的大鼠被认为手术失败。或者，通过腹腔注射巴比妥钠30 mg/kg体重麻醉健康的仔猪。麻醉右上肢，建立右上肢，使用鼻导管供氧，固定仰卧位，并做上腹中线切口。它在腹部分层，并释放门静脉和右肾静脉。向门静脉注射0.25 mg肝素，取一根充满2％肝素盐水的硅胶塑料管（长15 cm，直径0.8 cm），距游离右肾静脉的远端2-3 cm。固定下腔静脉，从门静脉的近端到远端插入约1.5厘米的一端以固定它，打开旁路管，检查是否有明显的出血，然后打开腹部。两天后，我进入了第二阶段的手术。进入腹部后，切开肝周围的所有韧带，即肝动脉的肝分支（包括左右三角肌韧带，冠状动脉韧带，镰状韧带和肝胃韧带）。缝合，*后结扎肝动脉和胃，肝动脉完全阻断人肝血流，并通过股动脉导管术监测血压。完全阻断流向肝脏的血液后一小时，四小时和七小时，取出小块肝组织，分别用10％甲醛和0.25％戊二醛固定。然后关闭腹部。在手术过程中，向实验猪静脉内注射500 ml的平衡盐和800,000 U的青霉素，死亡后进行尸检，并收集和检查肝脏样本。在建模过程中，动态观察模型动物的一般状况和死亡时间，同时收集全血以准备血清进行生化检查。建模后，将动物处死并收集肝脏以进行组织学形态学检查。

　　（2）模型特征：大鼠可以在手术后立即醒来，站起来并四处走动。但是，1-2小时后会出现肝衰竭。 12小时后，肝昏迷连续出现，表现为冷漠，身体变圆。小鼠毛发增多，活动减少，拒绝喝水或饮食，尿液发黄。进行了85％肝组织切除的模型动物的12小时生存率为93％，都在48小时内死亡；经过95％肝组织的模型动物生存了2、4、6和12小时，组织切除率为92、分别为％，75％，58％和50。 ％，所有人都在24小时内死亡。模型仔猪在人肝中的血流完全阻塞后的12至16个小时内死亡。手术后十二小时，丙氨酸转氨酶（ALT），血氨（NH3）和总胆红素（TBIL）升高，血糖（GLU）降低。仔猪肝血流受阻后，丙氨酸氨基转移酶（ALT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST），总胆红素（TBIL），Amm，尿素氮（BUN），肌酐（CRE），凝血酶原时间（PT）逐渐增加。 ，白蛋白（ALB）和纤维蛋白原（FIB）逐渐降低。手术后12小时处死大鼠时，剩余的肝组织为暗红色，囊肿，表面充血。在显微镜下，肝小叶的结构被破坏，肝细胞大量变性坏死，细胞质松散，坏死区被炎性细胞浸润，肝窦呈扩张状，呈网状。 ，并且看到充血和出血。模型仔猪完全阻塞血液流向肝脏后一小时，肝小叶的结构和肝细胞的排列仍然正常，圆盘间隙略微加宽，肝细胞浑浊肿胀。核膜和核仁仍然透明；在光学显微镜下观察4小时后，肝小叶的结构仍然存在，肝细胞的位置不受干扰，并且肝板。肝之间的空间明显扩大，中央静脉塌陷，肝内液泡变性，细胞核收缩，细胞核消失；在糖原颗粒的电子显微镜下可见细胞质均质化，粗囊的脱粒，线粒体水肿，模糊的晶体，溶解，某些线粒体的细胞间胆管微绒毛明显减少，核染色质积聚，核畸形和夹杂物的假核形成。 7小时后，后镜显示肝小叶结构紊乱，肝细胞排列紊乱，肝板解离，肝板解离更加明显，肝液混浊肿胀和液泡变性。肝细胞质较突出。 ，核染色质被边缘化，一些肝细胞膜未被边缘化。它是完整的，并显示开始溶解坏死的迹象。通过立即的肝组织学显微镜检查在肝衰竭和死亡时，发现模型猪的肝小叶的结构无法辨认，肝细胞减少，排列受到干扰，肝板被解剖，并且椎间盘间隙扩大了。 ，并且有一个广泛的，局部的，有斑点的肝脏。

　　（3）比较医学急性肝衰竭是由弥漫性肝细胞坏死和/或多种因素引起的突然严重肝损伤的综合征。患者死亡率可能高达75％。病因主要由肝炎病毒引起，也可能由一次或多次外伤，药物或有毒的过量引起。当前，急性肝衰竭的动物模型主要有两类：手术和药物毒性肝损伤，其中*典型且*常用的是全肝或部分肝切除，这是一种建模方法。全肝切除术无疑会导致肝衰竭，但该模型具有临床急性肝衰竭的特点，包括不可逆的病程，短暂的肝昏迷，缺乏循环损伤或肝细胞死亡，这与病理过程相去甚远。结果，有毒物质被连续释放并且肝功能异常仅在模型动物死亡前2-4小时出现。鉴于这些缺点，人们已经研究并建立了替代部分肝切除术的急性肝衰竭动物模型。在正常情况下，动物在正常肝功能下可以耐受高达70％至75％的肝切除术。当肝切除术超过75％时，就会发生致命的肝衰竭。如果肝切除术超过85％，则应给予其他治疗。门开到一个洞里，几乎100％的动物在48小时内死亡。该模型进行了部分肝切除，以去除85％至95％的肝组织。 6-12小时后，动物的肝肾功能异常并逐渐恶化，并出现了肝昏迷。组织学形态学检查显示肝小叶疾病，肝细胞耗竭，肝板剥离，Disse空间明显扩张，局部和有斑点的广泛肝细胞坏死的结构，所有动物在手术后24-48小时内死亡。与全肝切除术模型相比，部分肝切除术离临床更近，并且具有可以逆转的生理和病理特征。例如，在90％的肝切除大鼠中，在手术前连续3天进行肝细胞脾内移植，而40％的模型可以存活超过28天。到目前为止，人们已经成功地为大鼠，兔子，狗和猪等各种动物复制并建立了部分肝切除模型。其中，小动物模型更适合用于研究急性肝衰竭的病理生理过程以及药物干扰对这些过程的影响，而大动物模型则用于评估人工肝技术的有效性和安全性，因此更常用。肝全切除术的肝衰竭动物模型具有独特的优势。复制周期短，可以对肝切除术进行量化，并且在剩余的肝组织中没有特定的病理变化。在肝衰竭的临床症状模型中，动物症状和相关血液指标的变化是可复制且可靠的，具有良好的稳定性和较高的成功率。