动物造模,ST段抬高心肌梗死 中国实验动物信息网 2021-04-26 1759

　　背景：溶栓疗法对于缓解ST段抬高（STEMI）是必不可少的，ST段抬高占心肌梗死病例的25％-40％。对于不能及时接受溶栓治疗进行经皮冠状动脉介入治疗（PCI）的STEMI患者，建议遵循*新的ACCF/AHA和ESC指南。院前溶栓治疗是抢救缺血性心肌，改善预后并为临床治疗提供更多时间的重要干预措施。大多数患者可以从溶栓治疗中受益，但是溶栓药物的特异性，疗效和安全性有待提高。迫切需要开发具有快速作用和较小副作用的新药，并根据临床状况，尤其是血栓的成分，建立具有良好的可重复性和一致性的冠状动脉血栓栓塞症动物模型，非常必要。但是，在先前的动物模型中，大多数冠状动脉血栓形成是红色或混合栓塞，具有不同的临床环境。在使用冠状动脉血栓形成抽吸技术之前，尚不清楚在血栓形成时间范围内冠状动脉血栓形成的组成。*近，已经发现STEMI患者中的冠状动脉血栓形成主要由血小板，少量的纤维蛋白，少量的红细胞，白细胞和胆固醇晶体组成。

　　这种富含纤维蛋白的血栓类似于脑血管血栓形成。 Kirchhof等。使用白色栓塞创建了兔子脑栓塞模型，并评估了不应在心脏上使用溶栓药。这项工作的目的是建立一个理想的动脉血栓形成模型，以反映STEMI患者的临床症状。因此，我们比较了红色和白色栓塞病模型，并通过动物模型导管将溶栓药注入冠状动脉以研究其有效性。 方法：动物：21只雄性狗，体重12-17kg

　　栓塞准备：根据先前的研究，进行了一些改变。手术前四个小时，从每只实验动物中抽取3毫升自体静脉血以制备单独的匹配栓子。白血凝块：静脉血，无抗凝剂。在4°C下以1500pm离心5分钟。提取上清液并将其注入硅胶管（直径2.5毫米）中后，将血块置于37°C水浴中0.5小时。将凝块推入无菌板中，通过针管自动缩回3小时（直径约1.2毫米），并切成5毫米长的圆柱体。对于红色栓子：将注射器中的血液直接注入硅胶管中，并在37°C下放置0.5小时。后续过程与创建白色插头相同。我们还测量了全血和上清液中纤维蛋白，血小板和红细胞的浓度。血纤蛋白参数通过自动凝血分析仪测量，血小板和红细胞通过自动血细胞分析仪测量。冠状动脉血栓栓塞模型：用氯胺酮（35 mg/kg）和地西epa（15 mg/kg）麻醉动物，并每小时将其剂量减半以维持麻醉。芬太尼（0.  03 mg/kg）用于术中和术后镇痛。麻醉后，将动物以仰卧位固定在手术台上，并在辅助呼吸同步间歇性强制通气（SIMV）模式下进行气管插管。参数包括潮气量（10 ml/kg），呼吸频率（20次呼吸/分钟），呼气/吸气（E/I）比（1：1.5-2）和氧饱和度（55％）。监测心律不齐的发生。将肝素和rt-PA注射到左前臂头臂静脉中。将右前肢的腋动脉分支插入动脉鞘。在X射线引导下，将5F导管插入左冠状动脉以进行冠状动脉造影。将5F导管放置在左前降支的*对角分支附近，并注入塞子以阻止血液流经LAD的内侧和远端。由于导管不能深深插入，栓子可以到达对角分支。因此，操作员必须小心处理并防止栓子在较低压力下流入血管。 溶栓治疗：LAD阻塞后60分钟，此后每2小时注射1000U肝素钠。使用RT-PA输注（0.4 mg/kg）作为负荷剂量，并连续输注溶栓剂至少30分钟（1.2 mg/kg）。将剩余的rt-PA连续输注60分钟以上（0.8 mg/kg）。该程序符合药物说明，所用剂量在临床上是安全的。冠状动脉灌注测量：动物在栓塞术之前，期间和之后每15小时记录一次心电图，以确定栓子的状况，并改变ST段，T波等。记录。在冠状动脉血管造影上，该动物先前已向右前斜位和左前斜冠状动脉造影进行了栓塞注射。注射时，连续3小时每30分钟观察一次阻塞和/或自溶程度。 ..在使用rt-PA或心律不齐或心电图改变后的10、20、30、60、90和120分钟，还进行了冠状动脉造影术以评估溶栓的效果。再灌注时间定义为通过冠状动脉造影确认的再通时间。

　　病理学研究：使用扫描电子显微镜（SEM）分析自体栓塞。 3小时后自动收集样品，将样品用磷酸盐缓冲液洗涤3次，用2％戊二醛固定120分钟，然后用磷酸盐缓冲液冲洗3次。然后将样品固定120分钟，用渗透酸染色，冲洗，以等级顺序（50％，70％，90％100％）的乙醇浓度脱水40分钟，然后加入乙酸异戊酯（50），乙醇（％，70％，90％）。 ％，100％）。将血栓干燥10分钟并拉伸以获得用于分析的断裂表面。血块涂有金和钯，并用扫描电子显微镜检查。心肌梗塞面积通过2,3,5-三苯四唑氯化物（TTC）染色观察。 ，将氯胺酮（35 mg/kg）与地西1.5（1.5 mg/kg）组合静脉注射以麻醉动物，然后注射10％的氯化钾（15-20 ml）使动物安乐死。切除心脏，切开的部分为10mm厚，并用2,3,5-三苯基四唑氯化物（TTC）染色。梗塞区域是非TTC染色的区域，梗塞区域（％）是梗塞区域与左心室区域的比率。还观察到LAD的溶栓。在显微镜下检查皮肤，粘膜，心脏，脑，肺，肝，脾和肾脏，以估计出血的风险。

　　结果：实验中使用了21只狗。一只动物由于导管在LAD中的持续时间而死于心室纤颤。两只动物有倾斜的分支栓塞。这三只动物被排除在研究之外。*后，将18只动物随机分为3组。这包括红色插头组（n = 6），白色插头组（n = 6）和白色插头rt-PA组（n = 6）。心电图：所有动物手术前心电图正常。红栓子组和rt-PA组中有4例患者出现了短暂的室性早搏，除颤后窦性心律逆转。另外，如下所述，这6只动物当前正在根据冠状动脉造影术进行冠状动脉再通（再灌注）。自栓塞注射后，芦苇的ST段和V1-V4T波增加。在红色血栓组中，心电图的ST段下降，在120分钟时T波低，表明血栓自动溶解。在白色栓塞组中均未观察到这两种情况。用rt-PA溶解白色栓子后，ST段下降，T波下降。 冠状动脉造影：术前冠状动脉造影显示实验动物的冠状动脉正常。 LAD闭塞3小时后，两组红色栓塞组发生了再通，白色栓塞组的栓塞位置仍位于内侧和远端。这些结果表明白色栓子可能适合随后的实验。另外，在rt-PA治疗2小时后，6只狗中的5只经历了再灌注，但是对照组中的6只狗中没有一只经历了再灌注。t-PA组的平均再灌注时间为43.2±7.4分钟。

　　病理学研究：使用扫描电子显微镜观察各种自体栓塞的特征。白色栓塞比完全血栓栓塞更难，因为在相同体积中白色栓塞包含更多的纤维蛋白和更少的红血球。尸检后，皮肤，粘膜，心脏，脑，肺，肝脏，脾脏，肾脏或其他重要器官上没有明显的出血迹象。在梗塞区域的测量中，图像J用于获取各个切片的颜色，以量化心脏未染色部分的心肌坏死程度。百栓组和rt-PA组的梗死面积比分别为11.61±0.64％和4.48±0.52％。冠状动脉夹层溶栓与冠状动脉造影结果一致。

　　结论：首次建立了具有更好的稳定性，均匀性和更高的成功率的白色血栓形成的冠状动脉血栓栓塞模型。重要的是，该模型具有相似的特性，适用于在溶栓治疗时间框架内评估STEMI患者的血栓形成和溶栓治疗。该模型可用于评估治疗STEMI的新溶栓药。