动物造模,实体瘤局部治疗动物模 中国实验动物信息网 2021-10-28 1067

　　背景：兔VX2肿瘤模型通常用于实验肿瘤学。兔VX2肿瘤是由病毒引起的未分化的鳞状细胞癌。值得注意的是，该模型用于模拟不同类型的癌症，包括胰腺，肾脏和肝脏。如上所述，VX2细胞移植可通过移植实体肿瘤切片或注射肿瘤细胞悬液（新鲜或冷冻）来实现。各种形式的新辅助疗法和辅助疗法已与手术结合使用，以改善局部肿瘤的局部控制。肿瘤切除后的局部复发率包括直肠癌，软组织肉瘤和胰腺癌。该研究建立了具有局部移植的VX2冰冻肿瘤的兔肾旁癌模型。该肿瘤模型可用于评估实体瘤手术后局部复发高风险的多模式治疗。

　　方法：动物准备：25只新西兰兔（体重2.5-3.5公斤）可以随意进食和饮水，并适应该设施一周。手术后，将兔子放在临时加热的笼子中以恢复其重要功能。然后将其移至常规笼中。

　　VX2肿瘤片段的制备：VX2肿瘤片段在–80°C下保存在冰箱中直至使用。将装有肿瘤片段的瓶子置于37°C水浴中，尽管不完全融化，但迅速融化。使用无菌解剖钳小心地从冷冻保存管中取出肿瘤块，并放置在培养皿中。培养基含有25 ml含5％胎牛血清的DMEM培养基。随后，将片段用冷的汉克斯平衡盐溶液洗涤。在两个清洁过程中，这些碎片被仔细清洁了三次。将肿瘤置于15ml冷HBSS无菌培养皿中，置于冰上直至移植到动物中。 VX2后肢肿瘤的发展和收获：使用四只新西兰白兔复制竖脊肌的VX2肿瘤。手术前，将所有美托咪定（0.2 mg/kg），氯胺酮（10 mg/kg）和丁啡诺（0.5 mg/kg）麻醉。通过气管插管用2％七氟醚和盐酸氯胺酮（30 mg/kg）维持全身麻醉。麻醉和术前准备皮肤后，从右后肢到肌肉腹部切开一个2.5厘米的切口，并将两个5立方毫米的小肿瘤块移植到每个后肢的股四头肌中。止血并缝合切口。 ..肿瘤移植10-14天后，存活的肿瘤显示为约2.5厘米x 3厘米的可触及结节。在通过超声检查确认肿瘤生长之后，去除后肢肿瘤。每只兔子在全身麻醉下接受安乐死注射1 ml/kg tanax。随后，在肿瘤周围区域的右后肢进行皮肤准备和4-5 cm的切口。在肌肉中做两个弯曲的切口以进行肿块切除。将切除的肿瘤分成两部分，并去除坏死核，以得到可用的肿瘤。将肿瘤片段置于含有3％10000 IU/mL青霉素，链霉素10000μg/ ml和1％两性霉素B（250μg/ ml）的30 mlPMI1640培养基中放置30分钟，然后将肿瘤组织置于100 mm培养皿中。 -刮下肿瘤组织。肿瘤组织被分成几块（每块约5立方毫米）。分别用约20 ml HBSS，20 ml加5％胎牛血清DMEM/F12培养基快速清洗肿瘤片段3次。一半的肿瘤组织被用于建立肾脏肿瘤模型，其余的被冷冻。兔VX2肾旁肿瘤模型的建立：在该实验中，使用21只兔，其中5只移植有新鲜肿瘤组织，并且16只被冷冻。在牺牲动物之前，从兔耳中抽血进行测试。离心血液（3000pm，5分钟）以分离血浆部分。评估肝脏酶（ALT，AST，GGT，碱性磷酸酶），胆红素和全血细胞计数（CBC），每7天重复一次，直至处死动物。对兔子进行剑突脐带开腹手术，将肿瘤移植到肾脏中。暗沉的剥落会暴露腹膜。仔细解剖腹膜可发现腹腔。移动肠并在左腹膜后间隙的上肾囊上切开一个切口。接下来，将一块肿瘤放置在肾旁空间中。缝合切口。确认止血后，关闭腹部切口。手术后，将兔子置于临时加热的笼子中以恢复其重要功能，然后转移至正常笼子中。每天观察食欲，粪便，尿量和浓度，精神状态和活动水平。将采取适当的治疗措施，以解决日常观察中发现的异常情况，并采取适当的动物福利措施。体内超声图像评估肿瘤的生长。

　　Invivo高分辨率超声成像：每只兔子躺在自己的桌子上。用直肠探针监测体温，加热毯子以保持37±0.5°C。在对所有动物进行成像的过程中，所有成像设置都不会改变。在手术后7和14天检查动物的手术移植区域和肝肿瘤的发展。对于每只兔子，探查所有腹部实体器官和腹腔，以评估实体病变或腹膜后腔中是否存在游离液。特别是肾脏的大小，形状，位置以及肾脏周围和旁边的空间。组织学检查：在全身麻醉下处死动物，并用肉眼和显微镜检查肾脏标本。将每个器官切成5毫米的切片，两位观察者的共识确定了恶性病变。冷冻代表性样品，用低温恒温器切片，并用常规HE染色光学显微镜检查。结果：建立了兔VX2肢体肿瘤模型：建立了四只具有后肢的右下右脊髓肌肉的VX2肿瘤模型的兔子。将两个小肿瘤的冰冻切片（以前在温水中融化）移植到每只兔子后肢的四头肌中。 10-14天后，每只兔子都出现了约2.5 cm x 3 cm的肿瘤。手术后7天和14天，肿瘤的特征是浸润性团块不均匀和不规则，并检测到肌肉组织生长。牺牲兔子后，去除后肢肿瘤以获得VX2肿瘤细胞系的生长和肾脏肿瘤的发展。一半的肿瘤组织被用于以新的方式建立肾脏肿瘤模型，其余的被冷冻。组织学分析证实了肿瘤标本中存在肿瘤细胞。

　　兔VX2肾旁肿瘤模型的建立：兔接受剑突脐带开腹手术，以创建肾肿瘤VX2的兔模型。暗沉的剥离揭示了腹膜。结果显示在图中。必须强调的是，肿瘤碎片的移植可以实现100％的肿瘤生长。到目前为止，这是通过冷冻VX2肿瘤的外科肿瘤移植治疗兔肾旁癌模型的首次报道。结论：在这项研究中，首先将VX2肿瘤的冰冻切片移植到兔的肾上腺区域，以建立肾旁癌模型。这种方法*大程度地减少了非坏死性肿瘤的转移和发展，并优化了局部治疗中实验性肿瘤反应的评估。