动物造模,实验兔黏膜损伤模型 中国实验动物信息网 2021-10-09 1686

　　简介：鼻中隔粘膜可能会受到许多鼻腔手术的损害。随着鼻内窥镜颅底手术的发展和中隔瓣的重建，医源性中隔粘膜损伤的数量和程度在增加。然而，对隔膜粘膜愈合过程的全面了解仍不清楚，需要澄清影响其再生的因素。伤口修复过程已在牙龈和皮肤等组织中进行了广泛研究。尽管已经使用各种动物模型来研究鼻粘膜的愈合过程，但是目前尚无评估伤口愈合后对中隔粘膜的损害的研究。硅橡胶片通常用于鼻腔手术后促进粘膜的愈合。认为通过润湿伤口可以促进粘膜愈合过程。尽管已报道了隔膜成形术后硅橡胶片的临床结果，但该材料对隔膜粘膜的作用尚未明确记录。而且，相对较少的研究在组织学水平上解释了这种作用。透明质酸在鼻窦手术中具有较短的上皮形成时间，但尚未显示出可促进中隔粘膜的愈合。这项研究的目的是调查具有创伤性间隔缺损的兔鼻粘膜的再生过程，并评估各种干预措施在促进粘膜损伤愈合方面的有效性。材料：兔鼻中隔粘膜伤口愈合模型建立：将40只平均体重为3700克（3000-4200克）的新西兰大白兔用作实验动物。它随机分为四组：对照组，硅橡胶片组（SS），透明质酸组（HA），硅橡胶片和透明质酸组（SS + HA）。手术前，每只动物均进行肌肉注射，并以1：2的比例服用10mg/kg的佐伊瑞尔（125mg/ml的三苯甲酰胺，125mg/ml的佐拉西））和Lumpun（2％的噻嗪）进行全麻。剃鼻毛并用聚维酮碘溶液消毒。在将1％利多卡因与1：100,000肾上腺素混合后，用10μm的刀片穿过骨膜切开5厘米长的正中背侧皮肤切口。两侧的骨膜瓣都被抬起，以完全露出鼻骨。对于鼻截骨术，请使用4mm矩形直骨刀进入隔垫。将上侧软骨与鼻中隔分开，并进行下鼻甲的双侧部分切除，以完全暴露鼻中隔。使用我们的圆形打孔器制作直径7毫米的圆形粘膜切口。圆形病变的粘膜上升并剥离软骨膜，露出下鼻中隔的软骨。用纱布止血，左中隔在16只兔子的介入侧，右24只在介入侧的兔子。对照组中，除去粘膜后，提起并复位鼻骨，并闭合皮肤。对于SS组，将1 cm x 1 cm的硅橡胶片放在有缺陷的隔垫上，并用5-0 Vicryl固定在隔垫上。在HA组中，按照制造商的说明将Melgel切成1 cm x 1 cm的正方形，放在受损的隔膜中，并用1 ml的无菌盐水水合。*后，在SS + HA组的情况下，在HA顶部粘贴硅橡胶片。连续3天肌肉注射普鲁卡因青霉素（40,000 IU），皮下注射芬太尼（0.02 mg/kg）进行镇痛。所有操作均由研究人员执行。在第1、2、3、4和5周处死每组两只动物，以评估粘膜的愈合过程。获得整个软骨间距的评估。粘膜再生分析：将收集的隔膜用磷酸盐缓冲盐水漂洗3次，以获得伤口部位的数字照片。用温和的吸力和冲洗液清除隔膜上残留的凝块，异物和肉芽组织。使用带有光学显微镜的千分尺测量样品上*短的距离，并分析剩余缺陷的直径。小于0.01毫米的直径被认为已完全愈合。然后将样品在10％的甲醛缓冲液中固定24小时。然后将其沿冠状方向嵌入石蜡中。收集四个4μm厚的鼻中隔缺损，并用HE染色。在光学显微镜下评估切片，并对再生的中隔粘膜进行组织学分析。测量从软骨缺损到软骨过渡区的粘膜厚度。黏膜厚度指数（MTI）是再生黏膜与对侧完整黏膜的比率。再生粘膜的上皮厚度指数（ETI）与基底膜的厚度相同（放大400倍）。睫状细胞指数（CCI）被计算为再生侧上新形成的纤毛细胞数与相对侧上的纤毛细胞数之比。结论：室间隔粘膜缺损的大小：围手术期无动物死亡，所有40只兔子均为标本。梅尔吉尔？手术后1-3周完全愈合的兔子鼻中隔，无论是否存在硅橡胶板。记录间隔粘膜缺损的平均大小。对照组在术后1、2、3、4和5周的平均伤口大小分别为5.1、3.65、1.2、0.75和0.05毫米。手术后5周（0.1毫米和0毫米），缺损完全愈合。术后1、2、3、4和5周，SS组的平均缺损大小分别为4.35、2.1、0.35、0.15和0 mm，而HA组为5.1、3.8、2.05、0.85、和0毫米。 0.05 mm，SS + HA组分别为4.05、3.15、1.75、0.65和0 mm，5周后每组均观察到完全的粘膜愈合。 SS组的伤口比对照组提前了一周愈合。术后2周内，SS缺损的平均大小也明显减少。在其余的组中，缺陷大小没有显着差异。粘膜和上皮厚度：术后早期观察到正常气道纤毛和皮下上皮的丧失。整个粘膜和上皮的厚度随时间增加。对照组的平均对侧粘膜厚度和上皮厚度分别为167μm和29μm。术后1、2、3、4和5周，对照组的平均MTI为0.95、1.45、1.95、1.4和1.1、SS组为1.05、1.6、1.25、1.3和1.15、 。 HA组分别为1.2、1.25、1.35、1.25和0.95、而SS + HA组分别为0.75、1.2、1.2、0.75和0.95、干预组的MTI差异无统计学意义。手术后一周，四组动物的平均ETI为0.5、0.45、0.55和0.6、术后2周0.6、0.7、0.8、0.6、术后3周0.7、0.85、0.65、0.6、术后4周0.75、0.8、0.55、0.6、术后5周0.65、0.55、0.6和0.45、 5周后，每组的粘膜上皮厚度未完全恢复。在任何给定时间，干预组之间的ETI均无显着差异。睫状细胞指数：随着时间的流逝，再生的粘膜纤毛上皮细胞数量增加，CCI在手术后的5周达到1、术后1、2、3、4和5周，对照组的平均CCI为0.2、0.45、0.68、0.89和0.97 mm，而SS组的平均CCI为0.3、0.7、0.83、0.85和0.98毫米。 HA组为0.45、 0.63、0.67、0.83、0.93mm； SS + HA组分别为0.35、0.47、0.63、0.75、0.9mm。术后早期将硅橡胶片和透明质酸与对照组进行比较。持续时间（手术后1-2周）CCI增加，但差异无统计学意义。术后晚期CCI类似于干预。结论：已经提出了一种新的兔鼻中隔模型，以有效评估鼻粘膜的愈合。应用于鼻中隔粘膜缺损的硅橡胶片可在损伤的早期阶段显着增强粘膜再生，*终导致更快的愈合。