动物模型,慢性萎缩性胃炎 中国实验动物信息网 2022-02-05 1295

　　（1） 复制方法

      1）鼠标模型：BALB/c鼠标，SPF级，6-8周龄。禁食12小时并脱水8小时后，隔天接种100μlHp（SS1）培养悬浮液1万亿CFU/L，共3次。 Hp（SS1）培养悬浮液的制备：向Hp（SS1）菌株接种10％羊血和几种抗生素（10μg/ ml万古霉素，3μg/ ml多粘菌素，5μg/ ml两性霉素B），5μg/ ml （硫酸盐增强剂）在布鲁氏肉汤琼脂中，在37°C，5％O2、10％CO2、85％N2下孵育48小时，然后用PBS洗涤并选择通过功率测试的PBS。 接种Hp的第12和24周后，切掉脖子，张开腹部，取下胃，沿胃的大弯曲切开，用PBS冲洗胃中的内容物，并从胃中去除食道到十二指肠球的组织。我沿着一条小曲线切开。 10％甲醛固定，石蜡包埋，切片5μm，HE染色观察炎症反应，Giemsa染色观察Hp菌落形成。

　　2）大鼠模型：Wistar幼鼠，体重110-130g，禁食12小时，用5％Na2HCO3溶液管饲2ml /小鼠，1,000,000,000,000 CFU/LHp（S67和s73）混合菌株2ml /小鼠15一分钟后。每周感染一次或四次。在*后一次感染后的一周，将动物急性处死，将胃从胃中移出，并沿胃的大曲率切开胃。用PBS冲洗胃内容物。从幽门的相对固定部分，直接涂片，尿素酶测试和HP培养中取出五个组织，其余的胃用10％甲醛固定以进行组织病理学检查。

　　3）蒙古沙鼠模型：蒙古沙鼠（Mongoliangerbil，MG），8周大，禁食12小时，喂食50％乙醇0.3毫升/小鼠，第二天禁食，无水1000000000000 CFU/LHp细菌溶液0.5毫升/每天早上和下午一次制作模型，第二天早晨对胃进行灌胃，该模型将在12周内完成。将模型动物在水中禁食24小时，然后处死。处死前从眼睛收集血液，分离血清，并通过ELISA检测抗Hp抗体。处死后，打开胃并沿其较大的曲率切开胃。用生理盐水轻轻冲洗胃残余物。观察胃粘膜的一般状况，然后培养并涂刷一半的粘膜组织，进行快速尿素酶测试，并用10％甲醛固定另一半的粘膜组织以进行组织病理学检查。去做。

　　4）小型猪模型：在中期妊娠后，在手术室剖腹产交付了中国*头小型猪，并在无菌隔离器中饲养了乳猪。 ..第10天，连续3天每天口服一次吲哚美辛12.5mg，第4天，以1000000000000CFU/LHp细菌溶液2ml /头，1/3d，共3次口服。然后，将动物转移至实验动物的第二环境，并在Hp施用后30天处死，收集食道，胃体，胃窦和十二指肠粘膜标本，用HE组织切片染色，并观察组织。对该研究进行了修改，以改变并行尿素酶法检测Hp细菌，Warthin-Starry银染法发现Hp细菌以及微氧培养法培养Hp细菌。 （2）模型表征在模型小鼠中感染12周后，在胃组织表面的粘液和上胃窝的胃组织中观察到大量的Hp菌落形成。特别地，可以看到在胃窦和眼底的交界处的菌落形成密度。 24周时Hp集落形成的密度*高，增加；除萎缩（腺体变形和结构异常）外，胃上皮细胞变性的典型特征，尤其是炎性细胞浸润；感染12周时，炎性细胞浸润多核淋巴细胞占主导地位，中性粒细胞和嗜酸性粒细胞在24周内浸润。当MG模型感染4周时，检测到Hp感染，并且在12周和24周时感染率达到100％。肉眼检查可见明显的出血，慢性活动性胃炎，胃粘膜溃疡，有时深溃疡到达肌肉层。显微镜检查显示，感染4周后，在胃窦和幽门的胃黏膜上皮细胞，隐窝上皮细胞和固有层中出现了许多炎症细胞，包括嗜中性粒细胞，淋巴细胞和单核细胞。被显示。细胞和粘膜下血管扩张并充血，腺体萎缩，上皮细胞变性和坏死。随着时间的流逝，炎症细胞的浸润变得更加强烈，并逐渐形成淋巴滤泡，这些滤泡以淋巴细胞聚集为主导。在胃窦，幽门和胃体粘膜上皮细胞表面有粘液，胃隐窝和上皮细胞可以清楚地看到多个Hp的存在。在模型小型猪中感染30天后，胃的粘膜表面会稍微变厚，水肿，食道，胃和十二指肠粘膜具有不同程度的浅表粘膜侵蚀和炎性渗出物以及固有层。有炎症细胞浸润。可见部分淋巴样滤泡增生，表明慢性活动性胃炎的病理特征。细菌学测试表明，所有HP感染在食道，胃，胃窦，十二指肠，小肠和大肠的粘膜中均为阳性。使用Warchin星光银染色，在胃和胃的胃窦粘膜上发现了许多棒。 Hp或S型Hp细菌被染成黑色，在某些病灶中可见Hp积累，在食道和十二指肠粘膜中也明显地染有深棕色Hp。 （3）比较医学大量的流行病学数据证实Hp是非侵蚀性胃炎（包括慢性萎缩性胃炎）的主要原因。 Hp是一种螺旋性革兰氏阴性生物，可引起大多数非侵蚀性胃炎及其并发症。感染细菌的人类会引起胃粘膜发炎，影响胃分泌系统。使胃粘膜对酸损伤更敏感。在这方面，研究人员正在尝试使用不同的方法用HP感染不同的动物，以建立由HP感染引起的慢性萎缩性胃炎的类人动物模型。试图设定罗爽标准。该标准要求：①Hp定植在胃粘膜中，并且与人体相似的病理变化出现在胃体和胃窦中。 ②每克胃组织中有一定量的Hp。 ③观察HP与胃粘膜之间的粘连。 ④需要长期持续的细菌感染。使用的菌株必须是能在体外进行一定数量的亚培养后能感染动物的稳定菌株。通过此标准，研究人员能够成功地连续感染Hp，并在小鼠，大鼠，沙鼠，狗和猪中诱导出慢性胃炎的动物模型。但是，对于大多数动物而言，Hp的低定植率和短期感染始终是影响建模成功率的不可逾越的技术障碍。因此，选择对Hp敏感的动物和Hp菌株具有强烈动机的技术。需要。例如，Hp（SS1）是已经分离的菌株，并且适合于通过在小鼠胃中继续传代而在小鼠胃中定植。该菌株是高度动态的，包含cagA和vagA，属于I型Hp。流行病学研究表明，I型Hp与消化性溃疡的发展密切相关，包含致病岛，表达vacA，并且对液泡毒性呈阳性。将此菌株接种到SPF级BABA/c小鼠的胃中可引起动物胃组织的严重病理变化，包括正常胃腺的丧失，糜烂和溃疡。建模成功率为100％。 Hp用于制备大鼠，因为在没有胃粘膜损伤的情况下，与小鼠相比，Hp感染的可能性较小，因此通常先损伤大鼠胃粘膜然后再感染Hp几乎没有事可做。相关的慢性胃炎模型。 MG自身的HP感染率非常低，但是皮下注射吲哚美辛20 mg/kg体重或在胃内注射50％乙醇5 ml/kg体重会使感染率增加到70％以上，并伴有明显的胃炎。可以造成模型。组织形态学症状包括3周内粘膜糜烂，粘膜层中性粒细胞和单核细胞浸润，固有层和黏膜下层固有层，6周时萎缩，萎缩和肠化生。 -第24周的肠上皮化生。值得注意的是，在MG感染后，Hp会在胃中长期持续定居，主要集中在胃表面的粘液层中，少量粘附在表面粘液细胞的表面。 MG胃中的细菌数量可达到100,000 CFU，发生的病变主要发生在鼻窦，就像人类一样。 ③与罗爽标准相比，③较不通用，但所有其他标准均符合该标准。除了在上述动物中成功感染HP外，在国外的Saijou狗，Saijo猪和某些不育猪中也可以成功复制HP感染模型。由于猪是杂食动物，因此它们的解剖结构，生理和进食习惯与人非常相似，因此选择猪作为实验动物是一个合理的方面。但是，由于复杂的模型复制技术，较高的环境要求和昂贵的模型构建，因此实际应用很少。在这种情况下，一些研究人员在西条条件下建立了Hp感染，然后试图在正常条件下饲养这些动物，导致Hp继续存在，在整个西生猪实验中，不可避免的相遇已得到解决。价格可承受的技术和价格等瓶颈。实验上，感染Hp后，模型动物首先在the门的非腺性部位引起短暂的，无干扰的嗜中性白细胞浸润，然后在胃的腺性部位引起淋巴细胞浸润；淋巴细胞。仅在粘膜下层开始与粘膜聚集，发展成粘膜下层和固有层，形成不连续的淋巴滤泡。通过Warcin Starry对胃粘膜组织的银染，Hp位于胃粘膜上皮和表层粘液保护层之间，类似于Hp在人胃中的表现。在中国*只小型猪中，复制Hp模型的一项重要技术是在Hp疫苗接种之前对非甾体药物消炎痛进行预处理。由于胃肠道，尤其是胃粘膜含有大量的前列腺素（PG），因此前列腺素会影响胃粘膜的分泌，调节胃粘膜的血流并保护粘膜。它对胃肠道的生理功能（例如屏障功能）具有各种调节作用。消炎痛可阻断体内前列腺素（PG）的合成。当消炎痛被摄入体内时，体内尤其是胃粘膜中PG的含量显着降低。这直接削弱了胃粘膜的屏障功能并降低了上皮细胞的保护功能，为HP定位在胃粘膜上奠定了基础。适当的条件。