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【动物造模】-如何建立小鼠诺如病毒荧光定量PCR检测方法?

  目的:建立鼠诺如病毒(MNV)实时荧光定量PCR检测方法,为建立标准化的MNV检测方法提供依据。

  方法:根据NCBI公布的60株MNV菌株的核酸序列设计特异性引物,构建标准阳性质控材料,建立MNV实时荧光定量PCR方法,并对特异性、敏感性、重现性和稳定性进行评价。该方法用于检测送检的766只小鼠的盲肠内容物样本,初步了解北京实验小鼠的MNV感染情况。

  结果:我们成功建立了MNV实时荧光定量PCR检测方法。该方法具有高度特异性,不会与同种人类诺如病毒 (HuNoV) 和猫杯状病毒 (FCV) 发生交叉反应。检测灵敏度。可达101份/μL。批内和批间CT值变异系数小于2?使用该方法在766份小鼠盲肠内容物样本中检出301份MNV核酸阳性样本,阳性率为39.3?

  结论:建立的MNV实时荧光定量PCR检测方法特异性好、灵敏度高、重现性好,可用于MNV的快速定量检测。

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