动物造模,蛋白9基因敲除小鼠 中国实验动物信息网 2021-06-25 869

　　目的：你想用CRISR/Cas9技术敲除小鼠基因组中的Bmp9基因片段，构建Bmp9基因敲除小鼠吗？

　　方法根据Bmp9基因的外显子序列设计合成sgRNA片段。体外转录，sgRNA与Cas9 mRNA混合 显微注射受精卵细胞后，将注射的受精卵细胞移植到受体动物中获得后代小鼠吗？是否提取并测序后代小鼠基因组 DNA 以鉴定其基因型？您想筛选纯合子小鼠的基因分型和野生型交配吗？同时采集纯合子小鼠的心、肝、脾、肺、肾，用总RNA和总蛋白匀浆，检测各组织中BMP9的表达。 qPCR、WB 和免疫组化？

　　结果：经过20bp sgRNA设计合成，体外转录、显微注射、再移植获得基因突变小鼠，连续交配获得产F2纯合子？ ，一个是5 bp的缺失突变，另一个是13 bp的缺失加上1 bp的插入突变？ qPCR、WB 和免疫组化结果是否表明与野生型 C57BL/6 相比，基因敲除小鼠肝脏中 BMP9 的表达显着降低？

　　结论：你想用CRISPR/Cas9技术成功构建BMP9基因敲除小鼠吗？