目的:建立一种快速、灵敏、特异的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测幽门螺杆菌的方法,用于幽门螺杆菌的定量检测。
方法:H. bilis保守基因P17序列全长ORF435bp PCR扩增,TA克隆,质粒标准pMD-HBP17构建。通过对pMD-HBP17标准品的定量分析,优化反应体系,检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重现性。通过建立的 qPCR 方法检测了 77 个临床样本,并与正常样本进行比较。聚合酶链反应。测试结果进行比较。
结果:建立的qPCR检测方法在108-101个拷贝的质粒DNA浓度之间显示出良好的线性和相关性。得到的标准曲线斜率达到-3.46、相关系数达到0.999,检测灵敏度达到20。 copy 77临床样本的检出率为14.3?高于正常PCR的检出率(7.8?。
结论:建立的H. bilisq PCR检测方法特异性好,灵敏度高,稳定性强,可用于幽门螺杆菌的定量和定性检测。