动物造模,单纯疱疹病毒感染模型 中国实验动物信息网 2021-12-27 2316

　　单纯疱疹病毒（单纯疱疹病毒，HSV）属于疱疹病毒家族，其基因组为线性双链DNA。人口感染率高达80％。单纯疱疹病毒可分为1型单纯疱疹病毒（HSV-1）和2型单纯疱疹病毒（HSV-2）。两者在生物学，自然史，生化组成和免疫学特征方面有所不同。感染是一样的。 HSV-1通常通过口腔分泌物传播，并经常潜伏在人体的三叉神经和上颈神经节中。另一方面，几乎所有的HSV-2都是通过性接触传播的，通常潜伏在人体的nerve神经根区域。 HSV可引起多种疾病，包括疱疹脑炎，疱疹性角膜炎，生殖器疱疹，新生儿感染和胎儿致畸性。由于疱疹病毒的宿主范围广，许多动物，包括兔子，豚鼠，大鼠和小鼠，都可以通过单纯疱疹病毒感染复制HSV-1潜伏感染的动物模型。当前，有许多用于HSV潜伏感染模型的接种方法，例如鼻内接种，脚趾接种，角膜刮擦接种，尾静脉接种和拔牙接种。建立模型的成功率和死亡率有不同的接种方法。模型动物。区别。

　　1生殖器疱疹模型

　　（1）复制方法用生理盐水洗净外阴，用干棉签擦几次，然后用李子针轻敲外阴，使外阴充血并渗出一点水..用棉签净外阴清洁。使用1毫升注射器吸取0.15毫升10-7次力TCID50病毒溶液，插入强行喂食针头，将针头插入3-4厘米豚鼠的阴道中，将病毒注射到阴道穹and中，然后缓慢撤回。将明胶海绵插入阴道以保持中毒状态。将少量毒液滴在针头上，然后用玻璃棒均匀涂抹，以使病毒穿透皮肤。 3-6天后，阴道中可能会出现不同数量和大小的水泡，这些水泡会融合在一起并造成严重伤害。水泡充满浆液，水泡表面脆弱，水泡中含有高滴度的病毒颗粒，水泡破裂形成溃疡。淋巴结肿大，在疾病开始时从阴道拭子和组织中分离出病毒。

　　（2）模型特征感染动物后，HSV病毒可破坏阴道粘膜和皮肤，在局部传播，并从阴道分泌物和组织中分离出该病毒。病毒从病变扩散到局部淋巴结，并可能进一步扩散。您还可以看到该病毒已经传播到神经系统，并且潜伏了很长时间。潜伏病毒被定期激活，引起皮肤和粘膜，疱疹性病变。 （3）比较医学疫苗接种后的所有豚鼠均表现出类似于人类生殖器疱疹的症状，主要表现为外阴发红，肿胀，水泡，溃疡和结ab。而且可以在神经系统中建立潜在感染，并且疱疹病变可以在接种部位自发复发。目前在药效学研究中报道的生殖器疱疹的外来动物模型包括小鼠，猴子和豚鼠。小鼠可发展成HSV-2生殖器感染，但很少显示可见的病灶并容易死亡。猴子的阴道HSV-2感染与人类非常相似，但是出于客观原因，限制了它们的使用。这种感染是理想的蠕虫病毒动物模型，因为它不仅表现出与人类早期和复发性I相似的临床症状，而且在神经系统中建立了潜在感染，并且死亡率低于小鼠。感染。

　　2疱疹性角膜炎模型

　　（1）复制方法将麻醉的实验小鼠放在显微镜下，然后用“十字”形的1 ml注射针和5μl2划痕实验小鼠的角膜上皮。 ×100000000 PFU /加毫升病毒落在角膜的划伤表面上。感染后，小鼠眼用荧光素钠染色，并在裂隙灯下观察到损伤。感染后24小时，模型小鼠的角膜上皮显示出不同程度的荧光素钠染色，其中大多数表现为点状染色和损伤。在感染的第三天，用荧光素钠染色角膜的范围。模型小鼠的数量增加并且角膜变得更严重。在第1天，出现的透明性和树突状病变较少，这是典型的变化，表明病变加剧；感染后7天，模型小鼠的角膜变得浑浊，失去透明度。 （2）模型特征由单纯疱疹病毒引起的单纯疱疹病毒性角膜炎是由T淋巴细胞介导的迟发性过敏性疾病。 CD4 + T淋巴细胞是导致破坏组织的间质层的小鼠模型。参与炎症的主要细胞。该病毒在小鼠角膜上皮细胞中复制和增殖，阻止宿主细胞蛋白质的生物合成，破坏细胞之间的紧密连接，破坏细胞并释放病毒颗粒。病毒颗粒深入传播，导致持续感染和失明。 （3）比较医学单纯疱疹病毒可以在小鼠中引起角膜炎，不仅容易发生潜伏感染，而且复发的可能性也较小。单纯疱疹病毒性角膜炎的小鼠模型可用于研究疱疹病毒性角膜炎中细胞因子和粘附分子的机制。相应的抗体也可以用于指导临床治疗的治疗研究中。小鼠模型不如兔子模型理想，并且缺乏病毒的自发释放和疾病复发，但是角膜炎症在小鼠感染后不久发生。这类似于人类。疱疹性角膜炎。

　　3疱疹性面神经麻痹模型

　　（1）复制方法收集体重为18-18 g的4周龄BAlb/cAJcl小鼠，并通过腹膜内注射50 mg/kg体重的戊巴比妥钠麻醉。耳廓和右舌前2/3分别接种6.7-10000000 PFU/ml的25μlHSV，并将左骨PBS用作对照。疫苗接种后6-9天内，右侧面神经麻痹，症状持续自发恢复3-7天。 HE染色的确认：面神经水肿和炎症改变。颞骨的面神经明显水肿，面神经管之间没有间隙。 （2）模型特征HSV-1可以在模型小鼠中诱发贝尔急性短暂性面神经麻痹。 HSV抗原已在小鼠的面神经，生殖神经节和面神经核中检测到。面神经可引起面神经麻痹。用FITC标记的抗gC单克隆抗体染色可导致膝状神经节，根部下降和面神经核出现免疫阳性细胞，从而导致病毒通过轴突逆行转运，即出现体液和细胞免疫显示的回应。 .. （3）比较医学模型动物的面神经的组织病理学变化与人铃铛麻痹相似，即严重的神经肿胀，液泡变性和面神经和面神经核中的炎性细胞，已发生浸润。瘫痪的一面是近端生殖神经节，相对较严重，尤其是在近端脑组织的神经根迁移中。该模型为对贝尔麻痹的病因和临床治疗进行更详细的研究奠定了动物测试的基础。

　　4疱疹性脑炎模型

　　（1）复制方法体重15-18 g的KM小鼠。首先，将单纯疱疹病毒（HSV-1）置于HeLa细胞中，并培养48小时。如果50％的HeLa细胞显示出扩大，圆形或融合的病变，则收集病毒滴度并确定TCID50 = 10。 -5次方；进行病毒培养并在颅内接种小鼠。接种的病毒浓度为TCID50 = 10-3、接种量为0.03 ml /只小鼠，注射部位为眼睛右上角与耳根之间的线，针头入口为2-3 mm ，并且有失误的感觉。在用于模型创建和观察的预定时间，处理小鼠脑组织以进行颅内HSV-1 DNA测定，收集脑组织以进行常规观察，并进行正常组织切片，用10％甲醛溶液固定以进行HE染色。在光学显微镜下观察。用2％戊二醛固定一部分脑组织后，用电子显微镜制备超薄切片，并用透射电子显微镜观察。 （2）模型特征接种HSV-1后，模型动物表现出正常的发病特征。接种疫苗后三到五天，开始出现各种严重程度的症状，表现为体重减轻，耸肩，卷发和四肢瘫痪。而且反应较慢，其中一些人出现困倦和偏瘫，不适和死亡。被HSV感染的小鼠在第4天开始出现症状，其中70％的动物在第5天生病，通常在7天内存活，并在发病后2天内死亡。用PCR法检测小鼠脑中HSV-1 DNA时，阳性率达到100％。接种病毒后，肉眼可见模型小鼠的脑组织，有明显的充血和水肿以及心室出血。在显微镜下观察时，小鼠大脑皮质细胞无序排列。形式和空泡。通过电子显微镜观察超细结构，发现模型小鼠的脑组织中存在线粒体变性和坏死，粗大的囊泡增大，液泡形成以及成熟和不成熟的病毒颗粒。建模简单，疾病特征明确，感染后小鼠死亡率高，生存期短。

　　（3）比较医学。人类是单纯疱疹病毒的天然宿主。人群中HSE的感染率可高达80％。儿童单纯疱疹病毒性脑炎（HSE）的主要临床原因是疱疹。单纯疱疹病毒1型。由于儿童中HSE的严重临床表现，通常可能危及儿童的生命，甚至幸存者也有严重的后遗症。目前，对儿童HSE的发病率尚未完全了解，建立理想的HSE动物模型进行研究非常重要。用HSV-1病毒接种并感染小鼠后，该病毒通过嗅神经传播到人脑，而没有病毒血症。模型动物的临床症状类似于人疱疹性脑炎。以这种方式建立的小鼠HSE模型适用于HSE的病因学，预防和治疗的研究。