动物造模,溃疡性结肠炎动物模型 中国实验动物信息网 2021-11-26 1741

　　（1）复制方法成年雄性BALB/c小鼠，腹部（不损伤皮肤）约2.0 cm x 1.5 cm，在丙酮橄榄油溶液中以3.3％2,4-二硝基氯苯（DNCB）（比例1：1）涂片标本至切腹部，每天1次，每次50μl，连续4天。从第5天开始，将直径为1 mm的硅胶管插入小鼠结肠，插管的尖端距离肛门3至3.5 cm，并将0.2至0.4％的DNCB乙醇溶液放入灌肠（比例3： 2）。 ，每天1次，每次2μl/ g，连续4天。在建模过程中，每天观察小鼠的体重和粪便特征，并使用疾病活动指数（DAI）对动物的状况进行评分。 ①体重：正常为0分，即降低1％至5％和6％。 10％，11％-15％，15％，1分，2分，3分，4分。

　　（2）粪便黏度：正常0分，疏松2分，腹泻4分。 ③粪便出血：正常为0分，优势为2分。灌肠后第9天，通过脱毛抽血，分离血清并检测血清NO和TNF-a水平；打开腹腔，分离大肠，且肠壁沿肠系膜附着。进行垂直切割，观察到整体形态变化。从严重病变中取出组织标本，固定在10％甲醛溶液中，常规包埋在石蜡中，HE染色，并在显微镜下观察结肠的病理变化。总体形态学评分标准：无结肠粘连（结肠容易与其他组织分离），无溃疡，无炎症0分，轻度结肠粘连，1分局部充血，严重结肠粘连和1溃疡（1分，1 cm炎症）可赚钱4分。微观病理评分标准：正常结肠粘膜覆盖0级，隐窝缺损1/3级，隐窝缺损2/3级2、上皮单层，轻度炎性细胞浸润浸润层为3级。粘膜糜烂4级溃疡，炎症细胞明显浸润。或者，成年雄性大鼠应在颈背上用10％Na2S溶液脱毛，然后每天一次在背部上滴2％DNCB丙酮，连续5天，每次5滴。随后，使用尼龙导管以0.25 ml /次/天的速率每天一次将0.1％DNCB乙醇溶液注入肛门的8 cm结肠腔，连续4天。建模后，每天观察模型动物的总体情况和胃肠道疾病的表现。我每周都要牺牲几只动物。用肉眼观察结肠粘膜和浆膜表面的外观，并切除并固定病变。使用10％甲醛溶液。正常石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜检查以确定肠壁各层中炎性细胞溃疡的形状，深度，类型，浸润程度，淋巴滤泡增生的变化以及纤维组织增生的形成。或者，在成年雄性豚鼠中，每天一次用2％DNCB乙醇溶液在脖子后侧剪掉约1平方厘米的头发，并将其掉在表面上，每次5滴，持续10-14天。随后，将直径为3 mm的硅胶管插入距肛门12 cm深度的肠道，注入0.5 ml的20％DNCB丙酮溶液，并在2天后处死动物。材料，观察和评价方法与上述相同。

　　（3）模型特征模型小鼠在24小时后开始出现灌肠，并在3天后失去了明显的体重。在第5天，0.2％DNCB灌肠显示肠粘连和肠胃气胀。我用显微镜观察了。腺体排列混乱，杯状细胞减少。粘膜固有层，隐窝脓肿和溃疡中弥漫性炎性细胞浸润清晰可见。 DNCB为0.4％的患者在结肠中广泛粘连，肠腔近端扩张，少量白色渗出液，结肠粘膜充血，坏死，并形成多处溃疡。下隐窝具有明显的缺陷，组织结构紊乱，粘膜侵蚀，出血，坏死和大面积的深溃疡。 ..模型大鼠具有四个连续的灌肠，缺乏能量，不适，浑圆，毛发松散，活动减少，食物消耗减少，粪便或粘液稀疏和血便。在*后一次水肿的12天之内，模型大鼠的结肠粘膜表现出不同程度的充血和水肿，其表面覆盖有粘液，血液和坏死组织，并且存在明显的溃疡；粘膜围绕溃疡。粘膜下充血水肿，有严重的充血水肿。或中度嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞浸润，以及少量至中等量的大单核细胞和淋巴细胞浸润；溃疡的底部主要是血管生成颗粒组织。 ，有些具有不同程度的纤维组织增生；肌肉层也浸润少量至中度的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，偶尔有大的单核细胞和淋巴细胞浸润。模型完成后十二至五十天，模型动物的结肠仍显示浸润和水肿，但随着时间的流逝，其程度逐渐减弱；在显微镜下检查，结肠粘膜和粘膜下层被轻度浸润并进入淋巴细胞，嗜酸性粒细胞是例子：主要炎症细胞浸润，偶有中性粒细胞和大肠浸润；淋巴细胞和嗜酸性粒细胞偶尔浸润到某些模型动物的肠壁的肌层，纤维组织中，增殖和局部黏膜萎缩，隐窝和肠上皮的形状不规则再生。模型豚鼠的组织病理学变化与模型大鼠基本相同。主要症状是肠壁充血，水肿，增厚，大量嗜中性粒细胞和其他渗透到粘膜下层，隐窝脓肿和溃疡的炎症细胞。严重时可形成和坏死。

　　（4）比较医学2,4二硝基氯苯（DNCB）是一种小分子化学物质，可用作与组织蛋白结合形成完整抗原的半抗原，刺激身体刺激T细胞。免疫反应。在该实验中，DNCB与动物的表皮摩擦，通过与皮肤蛋白结合而使淋巴细胞敏感。当致敏淋巴细胞再次在肠道中与DNCB接触时，变态反应就会延迟，类似于人溃疡性结肠炎。它表现为腹泻，便血，结肠粘膜发炎，甚至溃疡。模型动物结肠粘膜的组织病理学特征显然与完成模型后的时间有关。模型完成后12天内，结肠黏膜溃疡，周围组织和肌肉层可显示属于溃疡期的明显炎性细胞浸润；在12-50天内，结肠黏膜炎性细胞浸润减少，部分粘膜有明显的纤维组织。肠壁增生是溃疡的恢复期。由于对DNCB的响应因物种而异，因此在建模过程中DNCB的浓度，剂量和作用持续时间差异很大，应由实验者进行反复研究。该模型更适合于研究溃疡性结肠炎的病因，反应中涉及的炎性细胞的类型和方法。尽管该模型的特征不是周期长和复发性病变，但它是溃疡性结肠炎使用*广泛的动物模型之一、作为胃肠道中延迟变态反应的典型动物模型。