骨髓间充质干细胞,原代分离 z-bio 2024-12-06 4285

　　背景简介：

　　二十世纪七十年代，Friedenstein首次从骨髓中分离出一种多能基质细胞，呈梭形，可以进行体外克隆和多向分化，被称为CFU－Fs(colony－forming unit fibro-blasts)。随后，这种骨髓来源的基质细胞被进一步发现是间叶组织细胞谱系的共同前体细胞，因其具有干细胞的部分特性，而被命名为骨髓间充质干细胞(BMSCs)。

　　原代分离制备流程

　　处死大鼠，75%酒精消毒1-3min，取后肢双侧长骨（股骨、胫骨）；

　　剥除长骨外皮肤，脂肪，肌肉等组织；

　　将冰上放置的剥除肌肉后的长骨放入75%酒精中消毒2-3秒，放入D-PBS（含10倍稀释双抗）中洗涤1遍，放入D-PBS（含100倍稀释双抗）或者 完全培养基（推荐使用KG RPMI 1640）中，剪开骨髓腔，使用无菌注射器冲洗骨髓腔及骨骺端，冲出骨髓（主要要红骨髓）。

　　收集骨髓悬液，滴管吹散（1-3min，力道轻柔）,70μm细胞筛过滤，收集滤液，1000rpm 4-6min，调整密度（一条后肢建议铺一个T25瓶子），铺瓶/板培养。

　　2-7天全换液处理，一般建议细胞生长至合适密度以上进行传代处理。（推荐1传2；干细胞传代密度尽量大一点。）

　　培养基：DMEM/F12 + 20% FBS + 1% L-Glu + 1% p.s .

     操作展示